{"product_id":"13339","title":"Hieff NGS™ Fast-Pace DNA Cyclization Kit _ 13339ES","description":"\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eHieff NGS™\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Fast-Pace DNA Cyclization Kit is a single-strand cyclization kit specifically developed for the MGI high-throughput sequencing platform. Composed of high-quality enzymes and optimized buffers, it markedly improves reaction efficiency, enabling the entire cyclization workflow to be completed within 1 h.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eSpecifications\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003ctable class=\"MsoTableGrid\" border=\"1\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"311\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eCat.No.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"651\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e13339ES16 \/ 13339ES96\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"311\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eSize\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"651\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e16 T \/ 96 T\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponents\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003ctable class=\"MsoTableGrid\" border=\"1\" cellspacing=\"0\" style=\"width: 99.9734%;\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"188\" valign=\"center\" style=\"width: 16.5366%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponents No.\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"64\" valign=\"center\" style=\"width: 6.29268%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"308\" valign=\"center\" style=\"width: 31.6098%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eName\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"213\" valign=\"center\" style=\"width: 23.5877%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e13339ES16\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"187\" valign=\"center\" style=\"width: 21.9245%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e13339ES96\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"188\" valign=\"center\" style=\"width: 16.5366%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e13339-A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"64\" valign=\"center\" style=\"width: 6.29268%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cimg src=\"https:\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0803\/9419\/1166\/files\/1_9ae06d09-4f3c-44c0-84ff-33184a673b0b.png?v=1792378129\" alt=\"\"\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"308\" valign=\"center\" style=\"width: 31.6098%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eTE Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"213\" valign=\"center\" style=\"width: 23.5877%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e0.75 mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"187\" valign=\"center\" style=\"width: 21.9245%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e3×1.5 mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"188\" valign=\"center\" style=\"width: 16.5366%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e13339-B\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"64\" valign=\"center\" style=\"width: 6.29268%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cimg src=\"https:\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0803\/9419\/1166\/files\/2_0ad934e0-fc68-4539-92ef-6ee346c01e92.png?v=1792378130\" alt=\"\"\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"308\" valign=\"center\" style=\"width: 31.6098%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eSplint Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"213\" valign=\"center\" style=\"width: 23.5877%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e240 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"187\" valign=\"center\" style=\"width: 21.9245%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e2×720 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"188\" valign=\"center\" style=\"width: 16.5366%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e13339-C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"64\" valign=\"center\" style=\"width: 6.29268%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cimg src=\"https:\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0803\/9419\/1166\/files\/2_0ad934e0-fc68-4539-92ef-6ee346c01e92.png?v=1792378130\" alt=\"\"\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"308\" valign=\"center\" style=\"width: 31.6098%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eLigase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"213\" valign=\"center\" style=\"width: 23.5877%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e80 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"187\" valign=\"center\" style=\"width: 21.9245%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e480 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"188\" valign=\"center\" style=\"width: 16.5366%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e13339-D\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"64\" valign=\"center\" style=\"width: 6.29268%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cimg src=\"https:\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0803\/9419\/1166\/files\/3_15ee054e-2e06-4f62-9022-80b6b91ad54f.png?v=1792378130\" alt=\"\"\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"308\" valign=\"center\" style=\"width: 31.6098%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eDigestion Enzyme\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"213\" valign=\"center\" style=\"width: 23.5877%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e32 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"187\" valign=\"center\" style=\"width: 21.9245%;\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e192 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eNotes\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003ch4 class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003eI\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e. Regarding Operation\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h4\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e For your safety and health, please wear a lab coat and disposable gloves during operation.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e2.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Before use, thaw each component of the kit at room temperature. After thawing, invert several times to mix thoroughly, briefly centrifuge, and keep on ice for use.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e When preparing each reaction mixture, gentle pipetting or mild vortexing is recommended; vigorous vortexing may reduce library yield.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e4\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e To avoid cross-contamination of samples, filtered tips are recommended; replace the tip when aspirating different samples.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e5\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e It is recommended to perform each step reaction in a PCR instrument with a heated lid; preheat the PCR instrument to near the reaction temperature before use.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e6\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Regularly clean each experimental area (wipe with 0.5% sodium hypochlorite or 10% bleach) to ensure a clean experimental environment.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e7\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e This product is for research use only!\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch4 class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003eII\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e. Sample Requirements and Handling\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h4\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eSample amount requirements\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e1.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e The recommended Input DNA amount for this kit is 1 pmol; if library yield is insufficient, the minimum input can be reduced to 0.5 pmol.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e If special cyclization input requirements exist, the input can be adjusted as needed, but in principle should not exceed 2 pmol.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Different DNA fragment sizes at 1 pmol correspond to different masses. Calculate using Formula 1 or refer to Table \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e1\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e to select the required Input DNA amount:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eFormula 1\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e \u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003eConversion between moles and mass of PCR products\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eMass of 1 pmol PCR product (ng) = Main fragment size of PCR product (bp) × 0.66\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"center\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eTable 1 Mass of 1 pmol PCR product for different fragment sizes\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ctable class=\"MsoTableGrid\" border=\"1\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"29.8400%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eInsert fragment size (bp)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"46.3800%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eMain fragment size of PCR product (bp)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"23.7400%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eYield at 1 pmol (ng)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"29.8400%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e150\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"46.3800%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e230\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"23.7400%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e152\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"29.8400%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e200\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"46.3800%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e280\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"23.7400%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e185\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"29.8400%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e250\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"46.3800%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e330\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"23.7400%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e218\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"29.8400%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e300\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"46.3800%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e380\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"23.7400%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e251\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eSample pooling requirements\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1) Input DNA can be a single sample or a mixture of multiple samples with different molecular barcodes.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2) The total amount of the mixed sample is recommended to be 1 pmol; if each sample requires the same amount of data, pool equally, and the mass required for each sample is calculated using Formula 2:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eFormula 2\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e \u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003eCalculation of required mass for individual sample in the pool\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003eRquired mass per sample (ng) = Mass corresponding to 1 pmol input DNA (ng) \/ Number of pooled samples, N\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3) The total volume of a single or pooled sample used for cyclization should not exceed 40 μL.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch4 class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003eIII\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e. Regarding Bead Purification\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h4\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Beads should be equilibrated to room temperature before use; otherwise purification recovery will decrease.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Beads should be thoroughly vortexed or pipetted up and down to mix well before each use.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e The 80% ethanol used for bead washing should be prepared fresh; otherwise recovery efficiency will be affected.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e4\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Before elution, beads should be air-dried at room temperature. Insufficient drying may leave residual anhydrous ethanol affecting subsequent reactions; over-drying may cause bead cracking and reduce purification recovery. Typically, air-dry at room temperature for ~5 min.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e5\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e For storage of the single-strand cyclization product, TE Buffer can be used for elution; the product can be stored at -20°C for 1 month.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch4 class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003eIV\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e. Regarding Library Quality Control\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h4\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e After purification of the single-strand cyclization product, it is recommended to quantify the purified product using the Qubit® ssDNA Assay Kit single-strand DNA fluorescent dye reagent.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e After purification, the yield of the single-strand cyclization product should be ≥ 80 fmol (sufficient for two sequencing runs).\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e Calculate using Formula 3 or refer to Table \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e2\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eFormula 3\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e \u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003eMass of 80 fmol single-stranded circles for different PCR product fragment sizes\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eMass of 80 fmol single-strand circle (ng) = 0.08 × Main fragment size of DNA (bp) × 0.33\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"center\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003eT\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eable 2 Mass of 80 fmol single-stranded circles for different PCR product fragment sizes\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ctable class=\"MsoTableGrid\" border=\"1\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"29.4400%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eInsert fragment size (bp)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"45.7600%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eMain fragment size of PCR product (bp)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"24.7800%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eYield at 80 fmol (ng)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"29.4400%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e150\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"45.7600%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e230\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"24.7800%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e6.07\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"29.4400%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e200\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"45.7600%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e280\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"24.7800%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e7.39\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"29.4400%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e250\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"45.7600%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e330\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"24.7800%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e8.71\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"29.4400%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e300\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"45.7600%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e380\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"24.7800%\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10.03\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eInstructions\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003ch4 class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003e1. Self-prepared Materials\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h4\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1. Purification beads: Cat#12601, Hieff NGS™\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e DNA Selection Beads; or Cat#A63880, AMPure XP Beads; or other equivalent products.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2. Library quality control: Cat#12645, ssDNA Assay Kit; or Cat#Q10212, Thermo Fisher Qubit ssDNA Assay Kit.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3. Other materials: 80% ethanol, low-binding EP tubes, magnetic stand, PCR instrument, etc.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch4 class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003e2. Workflow\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h4\u003e\n\u003cdiv style=\"text-align: center;\"\u003e\u003cimg src=\"https:\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0803\/9419\/1166\/files\/4_cf024c34-822b-4a73-81fc-372d57980f84_1024x1024.png?v=1792378132\" alt=\"Figure 1. Workflow of single-strand cyclization library construction.\" style=\"margin-bottom: 16px; float: none;\"\u003e\u003c\/div\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"center\"\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eFigure 1. Workflow of single-strand cyclization library construction.\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch4 class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003e3. Procedure\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h4\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eDenaturation\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eBased on the library length, transfer 1 pmol of the library into a 0.2 mL PCR tube and supplement with TE Buffer to a final volume of 40 μL (Table \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e3\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e).\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"center\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eTable 3  DNA Denaturation System\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ctable class=\"MsoTableGrid\" border=\"1\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"top\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"center\" style=\"text-align: left;\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"top\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"center\" style=\"text-align: left;\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eVolume (μL)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eSingle or pooled double-stranded library\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eX\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eTotal\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e40\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eMix thoroughly, denature at 95°C for 3 min in a PCR instrument, then immediately place on ice. After a 2 min ice bath, briefly centrifuge.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e[Note]: \u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003eSome PCR instruments cool rapidly once the program ends; failure to remove the tube promptly may cause DNA reannealing and reduced cyclization efficiency. Set the program to [95°C, hold]; after placing the library in the instrument, use a timer to count 3 min, then immediately remove the library and place it on ice.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eSingle-strand Cyclization\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1. Thaw the reagents listed in Table \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e4\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e, mix by inversion, and keep on ice until use.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2. On ice, assemble the reaction system described in Table \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e4\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"center\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003eTa\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eble 4  Single-stranded Cyclization Reaction System\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ctable class=\"MsoTableGrid\" border=\"1\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eVolume (μL)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eReaction from previous step\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e40\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eSplint Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e15\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eLigase\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e5\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eTotal\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e60\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3. Mix gently by pipetting or low-speed vortexing, and briefly centrifuge to collect the reaction mixture at the bottom of the tube.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e4. Place the PCR tube in the PCR instrument and perform single-strand cyclization according to the program in Table \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e5.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"center\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eTable 5  Single‑stranded Circularization Reaction Program\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ctable class=\"MsoTableGrid\" border=\"1\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eTemperature\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eTime\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eHeated lid 42°C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eon\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e37°C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e15 min\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e4°C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eHold\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eEnzymatic Digestion\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1. Thaw the reagents listed in Table \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e6\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e, mix by inversion, and keep on ice until use.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2. On ice, assemble the reaction system described in Table \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e6\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"center\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eTable 6  Enzymatic Digestion System\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ctable class=\"MsoTableGrid\" border=\"1\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eVolume (μL)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eReaction from previous step\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e60\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eDigestion Enzyme\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e2\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eTotal\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e62\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3. Mix gently by pipetting or low-speed vortexing, and briefly centrifuge to collect the reaction mixture at the bottom of the tube.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e4. Place the PCR tube in the PCR instrument and perform the digestion reaction under the conditions in Table \u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e7\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"center\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eTable 7  Enzymatic Digestion Reaction Program\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ctable class=\"MsoTableGrid\" border=\"1\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eTemperature\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eTime\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eHeated lid 42°C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eon\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e37°C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 min\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e4°C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eHold\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e5. After the reaction, briefly centrifuge and proceed immediately to purification.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003ePurification of Digestion Products\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eThis step uses magnetic beads to purify the enzymatically digested product.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1. Preparation: Take Hieff NGS™\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e DNA Selection Beads or Beckman AMPure XP Beads out of the refrigerator and equilibrate at room temperature for at least 30 min. Prepare 80% ethanol.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2. Vortex or invert the beads thoroughly to ensure uniform mixing.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3. Add 112 μL of Hieff NGS™\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e DNA Selection Beads to the digestion product and incubate at room temperature for 10 min.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e4. Briefly centrifuge the PCR tube and place it on a magnetic stand to separate the beads from the liquid. Once the solution is clear (~2 min), carefully remove the supernatant.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e5. While keeping the PCR tube on the magnetic stand, add 200 μL of freshly prepared 80% ethanol to wash the beads. Incubate at room temperature for 30 s\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003eec\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e, then carefully remove the supernatant.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e6. Repeat step 5 for a total of two washes.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e7. While keeping the PCR tube on the magnetic stand, remove the cap and air-dry the beads until small cracks just begin to appear.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e8. Remove the PCR tube from the magnetic stand, add 22 μL of TE Buffer, vortex or gently pipette to mix thoroughly, and let stand at room temperature for 10 min.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e9. Briefly centrifuge, keep the PCR tube on the magnetic stand, and once the solution is clear (~2 min), carefully transfer the supernatant to a new PCR tube.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eStop point: The cyclized and purified product can be stored at -20°C for up to one month.\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eQuality Control of Digestion Products\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eQuantify the purified product using the Qubit ssDNA Assay Kit fluorescent reagent; see Section 4 of Notes for details.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e","brand":"Yeasen","offers":[{"title":"16 T","offer_id":54650622607678,"sku":"13339ES16","price":105.0,"currency_code":"USD","in_stock":true},{"title":"96 T","offer_id":54650622640446,"sku":"13339ES96","price":615.0,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"thumbnail_url":"\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0803\/9419\/1166\/files\/fb0539a727e648a5885dd34af1c68317.png?v=1792378534","url":"https:\/\/www.yeasenbio.com\/sv\/products\/13339","provider":"Yeasen - Leading Innovation in Molecular Enzymes and Reagents","version":"1.0","type":"link"}