{"product_id":"92677","title":"Mouse Th1 Cell Polarization Kit _ 92677ES","description":"\u003cp\u003eThis kit provides a complete reagent set for the in vitro directed differentiation of mouse naive CD4⁺ T cells into functional Th1 cells. Built on the classical IL-12-driven STAT4\/T-bet differentiation pathway, it includes all components required for T cell activation, directed induction, and bypass blockade. The standardized, pre-optimized formulation is tailored for mouse splenic CD4⁺ T cells.\u003c\/p\u003e\n\u003ch3\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eProduct Components\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003ctable class=\"MsoNormalTable\" border=\"0\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eCat. No.\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent Name\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"117\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eAppearance\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"159\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eRecommended Working Concentration\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e92677ES10 (10 mL System)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e92677ES60 (100 mL System)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e92677ES-A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eMouse IL-2 Protein\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"117\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eLyophilized Powder\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"159\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e5 ng\/mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e5 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e5 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e92677ES-B\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eMouse IL-12 Protein\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"117\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eLyophilized Powder\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"159\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e30 ng\/mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e5 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e5 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e92677ES-C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eAnti-mouse CD3ε mAb\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"117\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eLiquid\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"159\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 μg\/mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e100 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e500 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e92677ES-D\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eNA\/LE Syrian Hamster anti-mouse CD28 mAb\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"117\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eLiquid\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"159\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e2 μg\/mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e100 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e100 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e92677ES-E\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eAnti-mouse IL-4 Recombinant mAb\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"117\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eLiquid\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"159\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 μg\/mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e100 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e1 mg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e92677ES-F\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eAnti-mouse IFN-γ Recombinant mAb\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"117\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eLiquid\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"159\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 μg\/mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e100 μg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e1 mg\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e92677ES-G\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003eβ-Mercaptoethanol (14.3 M)\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"117\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eLiquid\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"159\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e55 μM\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e100 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"138\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e100 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eNaive CD4⁺ T Cell Th1 Polarization Induction Protocol:\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e1. Coat anti-CD3ε\/CD28 Antibodies for T Cell Activation\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1.1 Dilute anti-mouse CD3ε and anti-mouse CD28 monoclonal antibodies to the working concentrations (10 μg\/mL and 2 μg\/mL, respectively) using sterile PBS.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1.2 Add 500 μL of the antibody mixture to each well of a 48-well cell culture plate, ensuring the liquid covers the well bottom.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1.3 Incubate the plate at 4°C for overnight coating (approximately 16-18 hours).\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e2. Seed Cells and Initiate Th1 Polarization\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2.1 The next day, aspirate the coating solution and gently wash the plate twice with pre-chilled sterile PBS to remove unbound antibodies.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2.2 Resuspend mouse splenic CD4⁺ T cells (purity \u0026gt;95%) isolated using a CD4⁺ T Cell Isolation Reagent (Cat. No. 37657ES10) in complete Th1 polarization medium at a density of 4-5×10⁵ cells\/mL.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eComplete Th1 polarization medium: RPMI-1640 basal medium supplemented with 10% FBS, 55 μM β-mercaptoethanol, 5 ng\/mL recombinant mouse IL-2, 30 ng\/mL recombinant mouse IL-12, and 10 μg\/mL anti-mouse IL-4 functional antibody.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2.3 Seed 500 μL of the cell suspension into each well of the pre-coated 48-well plate. Incubate at 37°C, 5% CO₂.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e3. Culture Maintenance and Cell Expansion\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3.1 After 48 hours of culture, gently pipette to collect the cell suspension and centrifuge at 300×g for 5 minutes.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3.2 Discard the supernatant, resuspend the cells in fresh complete Th1 polarization medium, adjust the cell density to 1×10⁶ cells\/mL, and reseed into new plates for continued culture.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3.3 Thereafter, monitor cell density and morphology under an inverted microscope every 12 hours. If the cell density becomes too high (e.g., \u0026gt;2×10⁶ cells\/mL), perform a half-medium exchange or split the cells into new wells at an appropriate ratio, supplementing with fresh complete Th1 polarization medium to maintain optimal cell growth.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e4. Cell Restimulation and Intracellular Cytokine Capture\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eOn day 5 of culture, collect the cells and wash once with pre-chilled PBS. Resuspend the cells in complete RPMI-1640 medium containing 10 ng\/mL PMA, 1 μg\/mL ionomycin, and 10 μg\/mL brefeldin A, adjust the density to 1×10⁶ cells\/mL, and incubate protected from light at 37°C, 5% CO₂ for 5 hours of co-stimulation.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eNegative Control (Th0) Setup\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eTo assess polarization specificity, a Th0 negative control should be set up in parallel. The procedure is essentially identical to that of the Th1 induction group, with the main difference being the medium used:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eTh0 maintenance medium: RPMI-1640 basal medium supplemented with 10% FBS, 55 μM β-mercaptoethanol, 10 μg\/mL anti-mouse IFN-γ, and 10 μg\/mL anti-mouse IL-4 neutralizing antibody.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eNote: No polarizing cytokines are added to this medium. Apart from this difference, cell seeding, medium exchange, density monitoring, and the day-5 restimulation are identical to those of the Th1 induction group.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eFlow Cytometry Analysis\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1. Cell collection: Collect the cells, wash once with PBS, discard the supernatant, and gently resuspend the cells in PBS by pipetting.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2. Cell counting: Count the cells using an automated cell counter to determine the total cell number, centrifuge at 300×g for 5 minutes, and discard the supernatant.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3. Viability dye staining: Add the diluted Fixable Viability Dye 452 at 100 μL per 1×10⁶ cells (refer to the product manual for dilution instructions).\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e4. Cell washing: Wash the cells with PBS, centrifuge at 300×g for 5 minutes, and remove residual viability dye.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e5. Cell fixation: Resuspend the cells in PBS at 1×10⁷ cells\/mL, dispense 100 μL per well into a 96-well plate, centrifuge at 300×g for 5 minutes, and discard the supernatant. Add 200 μL of 4% PFA per well and incubate at room temperature protected from light for 15 minutes.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e6. Cell washing: Centrifuge at 300×g for 5 minutes and discard the supernatant. Add 200 μL of PBS per well and centrifuge at 300×g for 5 minutes to wash the cells and remove residual fixative.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e7. Cell permeabilization: Add 200 μL of fixation\/permeabilization solution (BD 554714) per well and incubate at 4-8°C for 30 minutes.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e8. Cell blocking: Add 100 μL of 1× BD Perm\/Wash™ Buffer per well with Mouse IgG for blocking (steps 7 and 8 may be performed simultaneously), then centrifuge at 300×g for 5 minutes and discard the supernatant.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e9. Antibody incubation: Add 100 μL of 1× BD Perm\/Wash™ Buffer per well with Mouse Th1\/Th2\/Th17 Phenotyping Kit (BD 560758) (refer to the antibody manual for the recommended amount).\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e10. Cell washing: Centrifuge at 300×g for 5 minutes and discard the supernatant. Add 200 μL of PBS per well and centrifuge at 300×g for 5 minutes to wash the cells and remove residual antibodies, then resuspend the cells in 100-200 μL.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e11. Proceed to flow cytometry acquisition.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eNotes\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1. For your safety and health, wear a lab coat and disposable gloves during operation. This product is for research use only.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2. Optional medium supplements: 1% sodium pyruvate, L-glutamine, HEPES, and penicillin-streptomycin.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eProduct Prop\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eerties\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003ctable class=\"MsoNormalTable\" border=\"0\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"266\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eItem\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"564\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eSpecification\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"266\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eSpecies\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"564\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eMouse\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"266\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eTag\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"564\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eNo Tag\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"266\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eEndotoxin\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"564\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e\u0026lt; 1.0 EU per μg by the LAL method.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"266\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eReconstitution Method\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"564\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eMouse IL-2 and Mouse IL-12 proteins: Briefly centrifuge the vial before opening to collect the contents at the bottom. Reconstitute in ultrapure water to a concentration of 0.1-1.0 mg\/mL, which may be further diluted for subsequent experiments.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003ch3\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eFeatures\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e• Excellent differentiation efficiency with stable polarization rates.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e• Low endotoxin and high activity.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e• Stringent lot-to-lot quality control for excellent reproducibility.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eApplications\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cdiv style=\"text-align: center;\"\u003e\n\u003cimg src=\"https:\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0803\/9419\/1166\/files\/12_b2322011-4e9b-43d9-b279-899363571d07_1024x1024.png?v=1789462534\" alt=\"Figure 1. Flow cytometry analysis of IFN-γ expression in Th0 (left) and Th1 (right) polarized mouse CD4⁺ T cells. Th1 polarization efficiency: 53.6% (Th0: 0.011%).\" style=\"margin-bottom: 16px; float: none;\"\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e \u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/div\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"center\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eFigure 1. Flow cytometry analysis of IFN-γ expression in Th0 (left) and Th1 (right) polarized mouse CD4⁺ T cells. Th1 polarization efficiency: 53.6% (Th0: 0.011%).\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eStorage\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003ctable class=\"MsoNormalTable\" border=\"0\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eStorage Condition\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eMouse IL-2 Protein\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eMouse IL-12 Protein\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eAnti-mouse CD3ε mAb\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eNA\/LE Syrian Hamster anti-mouse CD28 mAb\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eAnti-mouse IL-4 Recombinant mAb\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eAnti-mouse IFN-γ Recombinant mAb\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eStore at -25 to -15°C, valid for 1 year upon receipt. Avoid repeated freeze-thaw cycles.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003eβ-Mercaptoethanol\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eStore at 2-8°C.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e \u003c\/p\u003e","brand":"Yeasen","offers":[{"title":"10 mL","offer_id":54454248177982,"sku":"92677ES10","price":405.0,"currency_code":"USD","in_stock":true},{"title":"100 mL","offer_id":54454248210750,"sku":"92677ES60","price":855.0,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"thumbnail_url":"\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0803\/9419\/1166\/files\/universe_b9e9ebcb-b5e9-497a-b61d-dc198ade0f05.jpg?v=1754453675","url":"https:\/\/www.yeasenbio.com\/hi\/products\/92677","provider":"Yeasen - Leading Innovation in Molecular Enzymes and Reagents","version":"1.0","type":"link"}