{"product_id":"12914","title":"Hieff™ HC Fast Tagmentase _ 12914ES","description":"\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eHieff™ HC Fast Tagmentase (10 U\/μL, 2.2 μg\/μL) is a mutant form of the wild-type Tn5 transposase. It recognizes the inside end (IE), outside end (OE), and mosaic end (ME) sequences of the Tn5 transposon, and achieves the highest transposition efficiency on DNA fragments containing the ME sequence.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eThis product is a high-concentration naked Tn5 enzyme. After being pre-loaded with adapters, it can efficiently and randomly insert the Tn5 transposon into target sequences, and is widely used in fields such as in vitro transgenesis and next-generation sequencing (NGS) library preparation.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eProduct Information\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003ctable class=\"MsoNormalTable\" border=\"0\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eCatalog No.\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eSize\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e12914ES50 \/ 12914ES76\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"481\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 µL \/ 50 µL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent Information\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003ctable class=\"MsoNormalTable\" border=\"0\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"182\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent No.\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"310\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent Name\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"317\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e12914ES50\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"175\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e12914ES76\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"182\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e12914-A\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"310\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eHC Fast Tagmentase (10 U\/µL, 2.2 µg\/µL)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"317\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 µL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"175\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e50 µL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"182\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e12914-B\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"310\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eAssemble Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"317\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e5 mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"175\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e25 mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"182\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e12914-C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"310\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e5 × Reaction Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"317\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e5 mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"175\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e25 mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"182\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e12914-D\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"310\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e6 × Terminate Solution\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"317\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e5 mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"175\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e25 mL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eFeature\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e• High enzyme activity concentration.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e• Wild-type Tn5 enzyme.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e• Compatible with different loading (pre-loaded) sequences.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e• Application directions: DNA library construction, ATAC library construction, bacterial mutant library construction, methylation, single-cell genome, and third-generation genome sequencing methods.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eApplications\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eTransposase applications include sequencing and microbial mutant library construction.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eProtocol 1: High-throughput sequencing library construction (for example). Before use, please carefully read the instructions for use.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e1. Adapter preparation\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1) Reference primer names and sequences for the Illumina platform:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003ePrimer A: 5′-phos-CTGTCTCTTATACACATCT-NH2-3′\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003ePrimer B: 5′-TCGTCGGCAGCGTCAGATGTGTATAAGAGACAG-3′\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003ePrimer C: 5′-GTCTCGTGGGCTCGGAGATGTGTATAAGAGACAG-3′\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2) Dissolve Primer A, Primer B, and Primer C in Annealing Buffer to a concentration of 100 μM.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3) Prepare the following reaction systems separately:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cdiv align=\"center\"\u003e\n\u003ctable class=\"MsoNormalTable\" border=\"0\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eReaction 1\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003ePrimer A (100 μM)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003ePrimer B (100 μM)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eTotal\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e20 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eReaction 2\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003ePrimer A (100 μM)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003ePrimer C (100 μM)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eTotal\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e20 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003c\/div\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e4) Vortex Reaction 1 and Reaction 2 separately to mix thoroughly, and briefly centrifuge to collect the solution at the bottom of the tubes. Place in a PCR instrument and run the following program: heated lid 105°C ON; heat at 94°C for 2 min. Immediately stop the reaction program after the time is reached (be sure not to exceed the reaction time; it is best to set a timer as a reminder). Do not open the PCR instrument lid; let the reaction tubes cool naturally in the PCR instrument for 2 hours, then cool for 5 min at 4°C or on ice.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eAlternatively, set the PCR program as follows: heated lid 105°C ON; 72°C 15 min; 60°C 10 min; 50°C 10 min; 40°C 10 min; 25°C 30 min.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e5) After the reaction is complete, mix Reaction 1 and Reaction 2 in equal volumes and mix thoroughly. Name the mixture Adapter Mix and store at −25 to −15°C.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e2. Transposome generation\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1) Prepare the following reaction system:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cdiv align=\"center\"\u003e\n\u003ctable class=\"MsoNormalTable\" border=\"0\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eVolume (μL)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eHC Fast Tagmentase (10 U\/μL, 2.2 μg\/μL)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eAdapter Mix (25 μM)*\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e8\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eAssemble Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eUp to 200\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003c\/div\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e*The Adapter Mix is prepared by the user according to the experimental purpose and sequencing platform.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2) Reaction conditions: mix thoroughly by gentle pipetting with a pipette. Incubate at 25°C for 1 h (heated lid OFF). The reaction product is named Tn5 Mix and can be directly applied to library construction experiments or stored at −25 to −15°C.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e3. DNA fragmentation test\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e1) Prepare the following reaction system:\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cdiv align=\"center\"\u003e\n\u003ctable class=\"MsoNormalTable\" border=\"0\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eVolume (μL)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eInput DNA (50 ng\/μL)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e1*\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e5 × Reaction Buffer\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e4\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eTn5 Mix\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e2**\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eddH2O\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eUp to 20\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003c\/div\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e*The larger the amount of input DNA, the longer the average length of the fragmented product; conversely, the smaller the amount, the shorter the average length of the fragmented product.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e**To increase the degree of fragmentation, increase the amount of Tn5 Mix; conversely, reduce the amount of enzyme used.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2) Fragmentation reaction program\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eMix gently by pipetting or vortexing, and briefly centrifuge. Perform the fragmentation reaction according to the reaction program shown in the table below.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cdiv align=\"center\"\u003e\n\u003ctable class=\"MsoNormalTable\" border=\"0\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eTemperature\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eTime\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eHeated lid 105°C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eON\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e55°C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 min\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e4°C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eHold\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003c\/div\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e3) Termination of DNA fragmentation\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003ePrepare the following reaction system. Add the reaction components in the table below to the above fragmented product, and mix thoroughly by gently pipetting 20 times with a pipette.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cdiv align=\"center\"\u003e\n\u003ctable class=\"MsoNormalTable\" border=\"0\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eVolume (μL)\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eFragmented product\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e20\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e6 × Terminate Solution\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e4\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eTotal\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e24\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003c\/div\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003ePerform the termination reaction according to the reaction program shown in the table below.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cdiv align=\"center\"\u003e\n\u003ctable class=\"MsoNormalTable\" border=\"0\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eTemperature\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eTime\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eHeated lid 105°C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eON\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e55°C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e10 min\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e4°C\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eHold\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003c\/div\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eAfter the sample temperature drops to 4°C, remove the PCR tube and purify the fragmented product. 1.2 × magnetic bead purification can be chosen; Hieff NGS™ DNA Selection Beads (Cat#12601ES) are recommended. Finally, elute the fragmented product with 21 μL ddH2O.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e4) Quality control\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003ea. Determine the concentration using a Qubit fluorometer.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eb. Detect the length distribution using an Agilent Technologies 2100 Bioanalyzer.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e5) Amplification of the fragmented product\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eAppropriate reagents can be selected for the amplification experiment according to the specific experimental purpose and sequencing platform.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eProtocol 2: Microbial mutant library construction\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eStep 1: Transposon preparation\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003ea. Design of the Tn5 transposon. The Tn5 transposon is a DNA fragment with 19 bp ME sequences at both ends, which can be synthesized by PCR using forward and reverse primers containing the ME sequence. To achieve the best transposition efficiency, a 5′ phosphate group needs to be added to the PCR primers at both ends. A typical Tn5 transposon is shown in Figure 1. ME sequence: 5′-[phos]CTGTCTCTTATACACATCT-3′\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eThe sense-strand sequence of the resulting transposon: 5′-CTGTCTCTTATACACATCT + target gene (resistance marker) + AGATGTGTATAAGAGACAG-3′\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cdiv style=\"text-align: center;\"\u003e\u003cimg src=\"https:\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0803\/9419\/1166\/files\/1_5cfac1be-406f-435b-96be-9a685eabc137_1024x1024.png?v=1788498771\" alt=\"Figure 1: Schematic diagram of the Tn5 transposon. The Tn5 transposon has 19 bp ME sequences at both ends, which can be specifically recognized by the Tn5 transposase.\" style=\"margin-bottom: 16px; float: none;\"\u003e\u003c\/div\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"center\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eFigure 1: Schematic diagram of the Tn5 transposon. The Tn5 transposon has 19 bp ME sequences at both ends, which can be specifically recognized by the Tn5 transposase.\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eb. Prepare the Tn5 transposome complex by sequentially adding the corresponding reagents according to the table below.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cdiv align=\"center\"\u003e\n\u003ctable class=\"MsoNormalTable\" border=\"0\" cellspacing=\"0\"\u003e\n\u003ctbody\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eComponent\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cb\u003e\u003cspan\u003eAmount\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eTn5 Transposon DNA (100 μg\/mL in TE Buffer, Step 2a)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e2 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eTn5 transposase (40 μM)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e4 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eGlycerol (100%, 714419ES)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e2 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003ctr\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eTotal reaction volume\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003ctd width=\"415\" valign=\"center\"\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003e8 μL\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003c\/td\u003e\n\u003c\/tr\u003e\n\u003c\/tbody\u003e\n\u003c\/table\u003e\n\u003c\/div\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e· This reaction does not require Mg2+ catalysis; do not use 5 × Reaction Buffer.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e· Referring to the Tn5 transposon design in (a), the Tn5 Transposon DNA is double-stranded DNA containing a selection marker (e.g., resistance marker), paired recognition sequences (e.g., ME sequences), and the target gene, and can be obtained by methods such as PCR.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e\u003cspan style=\"font-family: Inter;\"\u003e· This reaction system can be scaled up or down according to actual needs.\u003c\/span\u003e\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003ec. After mixing, incubate at room temperature for 0.5–1 hour.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003ed. Transform 1 μL of the transposome complex into competent cells by electroporation, allowing insertion to occur in vivo, and screen for positive strains based on the resistance marker. Recommended electroporation conditions: 50 μL competent cells, 1 μL transposome complex, 2 mm electroporation cuvette, 2500 V, electroporation time 5 milliseconds. The transformation conditions can be optimized based on the transformation efficiency obtained under these conditions. The number of transposition clones depends mainly on the host cells transformed, the endogenous restriction-modification system, and the transformation efficiency of the competent cells.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003ee. The constructed transposome complex can be stored at −20°C for 1 year.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003e2 Supplementary notes on in vitro transposition (especially applicable to the DNA transformation method)\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eFor certain bacteria with low transformation efficiency (such as the thermophilic bacterium Thermus thermophilus), the following alternative method can be considered: after mixing and incubating the Tn5 transposome with 1 μg of genomic DNA of the target bacterium, use a DNA polymerase to fill in the single-stranded gaps generated by transposition (this step is critical for certain bacteria). The treated DNA is then directly transformed (e.g., into naturally competent strains) or electroporated into the target bacterium.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3 class=\"MsoNormal\"\u003e\n\u003cb\u003e\u003cspan\u003eStorage\u003c\/span\u003e\u003c\/b\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eComponent A (HC Fast Tagmentase) should be stored at −85 to −65°C. Adapter assembly should be completed within one month after receipt of the goods, and the assembled product should be stored at −15 to −25°C.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\" align=\"justify\"\u003e\u003cspan\u003eThe other components should be stored at −15 to −25°C.\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003ch3 class=\"p\"\u003e\n\u003cstrong\u003eDocuments:\u003c\/strong\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\n\u003c\/h3\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eSafety Data Sheet\u003c\/span\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"p\"\u003e\u003ca href=\"https:\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0803\/9419\/1166\/files\/12914-MSDS-HB260901.pdf?v=1788498623\"\u003e12914_MSDS_HB260901\u003c\/a\u003e\u003cspan\u003e\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003cspan\u003eManual\u003c\/span\u003e\u003c\/p\u003e\n\u003cp class=\"MsoNormal\"\u003e\u003ca href=\"https:\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0803\/9419\/1166\/files\/12914-Manual-Ver.EN20260901.pdf?v=1788498623\"\u003e12914_Manual_HB20260901\u003c\/a\u003e\u003c\/p\u003e","brand":"Yeasen","offers":[{"title":"10 μL","offer_id":54365804462398,"sku":"12914ES50","price":445.0,"currency_code":"USD","in_stock":true},{"title":"50 μL","offer_id":54365804495166,"sku":"12914ES76","price":1500.0,"currency_code":"USD","in_stock":true}],"thumbnail_url":"\/\/cdn.shopify.com\/s\/files\/1\/0803\/9419\/1166\/files\/FkR6MXLhQQk4mJnPJiKggGvT3isv.png?v=1788499335","url":"https:\/\/www.yeasenbio.com\/ar\/products\/12914","provider":"Yeasen - Leading Innovation in Molecular Enzymes and Reagents","version":"1.0","type":"link"}