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| 物品单位 | 品牌 |
|---|---|
| 块 | Yeasen |
- 型号：10 U
- 货号：10153ES10
- 发布日期： 2022-04-29
- 更新日期： 2022-05-13
| 产地 | |
| 品牌 | Yeasen |
| 货号 | 10153ES10 |
| 用途范围 | |
| 英文名称 | |
| 纯度 | % |
| CAS编号 | |
| 规格 | 10 U |
| 保质期 | |
| 是否进口 |
产品信息
|
产品名称 |
产品编号 |
规格 |
价格（元） |
|
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 |
10153ES10 |
10 U |
115.00 |
|
10153ES60 |
100 U |
695.00 |
|
|
10153ES76 |
500 U |
2,585.00 |
|
|
10153ES80 |
1,000 U |
4,785.00 |
产品描述
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍，是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。酶溶液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体，可简便地进行高特异性的Hot Start PCR，极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增目的片段的长度可长达13 kb。本产品配备了优化缓冲液，使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品规格 |
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|
10153ES10 （10 U） |
10153ES60 （100 U） |
10153ES76 （500 U） |
10153ES80 （1,000 U） |
||
|
10153-A |
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) |
10 μL |
100 μL |
500 μL |
500 μL×2 |
|
10153-B |
2×Canace® Plus PCR buffer（含Mg2+，dNTPs） |
300 μL |
3×1 mL |
15×1 mL |
30×1 mL |
|
10153-C |
6×DNA Loading Buffer |
120 μL |
1 mL |
6×1 ml |
12×1 ml |
产品应用
基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。
活性定义
用活性化的大马哈鱼精|子DNA为模板/引物，74°C，30 min内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1 U。
运输与保存方法
冰袋运输。-20°C保存。有效期1年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
推荐PCR反应体系
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组分 |
体积 |
终浓度 |
|
ddH2O |
to 50 μL |
- |
|
2×Canace® Plus PCR buffer (含Mg2+，dNTPs) |
25 μL |
1× |
|
DNA模板 |
适量 |
- |
|
Primer 正向 (10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
|
Primer反向 (10 μM) |
2 μL |
0.4 μM |
|
Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL) |
1 μL |
1 U/50 μL |
【注】：1. 试剂使用：使用前要充分解冻混匀。
2. Mg2+终浓度：体系终浓度为2mM。如有特殊需要，可用50 mM MgCl2，以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。
3. 高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。
4. 不同模板的推荐使用量（25 μL反应体系）：
|
模板种类 |
扩增片段1 kb-10 kb |
|
基因组DNA |
50 ng-200 ng |
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质粒或病毒DNA |
10 pg-20 ng |
|
cDNA |
1-2.5 μL（不超过PCR反应总体积的1/10） |
PCR扩增程序：有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序。
两步法程序（优先推荐）： 三步法程序（常规程序）：
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
98°C |
3 min |
1 |
|
预变性1 |
98°C |
3 min |
1 |
|
变性 |
98°C |
10 sec |
30-35 |
|
变性 |
98°C |
10 sec |
30-35 |
|
延伸 |
68°C |
30 sec/kb |
|
退火2 |
60°C |
20 sec |
||
|
终延伸 |
72°C |
5 min |
1 |
|
延伸3 |
72°C |
30 sec/kb |
|
|
|
|
|
|
|
终延伸 |
72°C |
5 min |
1 |
梯度温度退火程序（难扩增基因推荐程序）: *不同扩增程序下的特点：
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步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
程序类型 |
两步法 |
三步法 |
梯度退火 |
|
预变性 |
98°C |
3 min |
1 |
|
速度 |
|
中等 |
慢 |
|
变性 |
98°C |
10 sec |
15，每个循环降低1℃ |
|
特异性 |
高 |
中等 |
高 |
|
梯度退火 |
70-55°C |
20 sec |
|
PCR产量 |
中等 |
|
中等 |
|
|
延伸 |
72°C |
30 sec/kb |
|
检出率 |
高 |
中等 |
高 |
|
|
变性 |
98°C |
10 sec |
20 |
|
|
|||
|
正常退火 |
55°C |
20 sec |
|
|
||||
|
延伸 |
72°C |
30 sec/kb |
|
|
||||
|
终延伸 |
72°C |
5 min |
1 |
|
|
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【注】：1. 预变性温度和时间：推荐温度：98°C，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2. 退火温度和时间：推荐温度：60°C，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3. 延伸温度和时间：推荐温度：72°C。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。
相关产品
|
产品名称 |
货号 |
规格 |
|
2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix (With Dye) 高保真酶预混液 |
10154ES03/08 |
1 mL/5×1 mL |
|
Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶 |
10148ES60/76/80 |
100 U/500 U/1000 U |
|
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix 高保真酶预混液HOT |
10149ES03/08 |
1 mL/5×1 mL |
|
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒HOT |
10909ES20 |
20 T |
|
Hieff CloneTM Zero TOPO-Blunt Simple Cloning Kit 零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒（不含MCS多克隆酶切位点） |
10910ES20 |
20 T |
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Hieff Clone® Plus One Step Cloning Kit 一步法快速克隆试剂盒HOT |
10911ES20 |
20 T |
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Hieff Clone® Plus Multi One Step Cloning Kit 多片段一步法快速克隆试剂盒HOT |
10912ES10 |
10 T |
|
Hieff MutTM Site-Directed Mutagenesis Kit 定点突变试剂盒HOT |
11003ES10 |
10 T |
|
Hieff MutTM Multi Site-Directed Mutagenesis Kit 多点突变试剂盒HOT |
11004ES10 |
10 T |
HB220407
