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Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase 10153ES
物品单位 品牌
Yeasen
  • 型号:10 U
  • 货号:10153ES10
  • 发布日期: 2022-04-29
  • 更新日期: 2022-05-13
产品详细说明
产地
品牌 Yeasen
货号 10153ES10
用途范围
英文名称
纯度 %
CAS编号
规格 10 U
保质期
是否进口


产品信息


产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶

10153ES10

10 U

115.00

10153ES60

100 U

695.00

10153ES76

500 U

2,585.00

10153ES80

1,000 U

4,785.00


产品描述


Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase,经基因工程改造而成。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的83倍,是普通Pfu DNA聚合酶的9倍。酶溶液中添加了常温可抑制聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性的两种单克隆抗体,可简便地进行高特异性的Hot Start PCR,极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力,扩增目的片段的长度可长达13 kb。本产品配备了优化缓冲液,使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。


产品组分


组分编号

组分名称

产品规格

10153ES10

(10 U)

10153ES60

(100 U)

10153ES76

(500 U)

10153ES80

(1,000 U)

10153-A

Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase

(1 U/μL)

10 μL

100 μL

500 μL

500 μL×2

10153-B

2×Canace® Plus PCR buffer(含Mg2+,dNTPs)

300 μL

3×1 mL

15×1 mL

30×1 mL

10153-C

6×DNA Loading Buffer

120 μL

1 mL

6×1 ml

12×1 ml


产品应用


基因克隆;复杂DNA模板扩增;高通量建库。


活性定义


用活性化的大马哈鱼精|子DNA为模板/引物,74°C,30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1 U。


运输与保存方法


冰袋运输。-20°C保存。有效期1年。


注意事项


1)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

2)本产品仅作科研用途!


推荐PCR反应体系


组分

体积

终浓度

ddH2O

to 50 μL

-

2×Canace® Plus PCR buffer (含Mg2+,dNTPs)

25 μL

DNA模板

适量

-

Primer 正向 (10 μM)

2 μL

0.4 μM

Primer反向 (10 μM)

2 μL

0.4 μM

Hieff Canace® Plus High-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μL)

1 μL

1 U/50 μL

【注】:1. 试剂使用:使用前要充分解冻混匀。

2. Mg2+终浓度:体系终浓度为2mM。如有特殊需要,可用50 mM MgCl2,以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。

3. 高GC模板:在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。

4. 不同模板的推荐使用量(25 μL反应体系):

模板种类

扩增片段1 kb-10 kb

基因组DNA

50 ng-200 ng

质粒或病毒DNA

10 pg-20 ng

cDNA

1-2.5 μL(不超过PCR反应总体积的1/10)

PCR扩增程序:有以下三种程序可选择,优先选择两步法程序。

两步法程序(优先推荐):                                                                                        三步法程序(常规程序):

循环步骤

温度

时间

循环数


循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

98°C

3 min

1


预变性1

98°C

3 min

1

变性

98°C

10 sec

30-35


变性

98°C

10 sec

30-35

延伸

68°C

30 sec/kb


退火2

60°C

20 sec

终延伸

72°C

5 min

1


延伸3

72°C

30 sec/kb






终延伸

72°C

5 min

1

梯度温度退火程序(难扩增基因推荐程序):                                                           *不同扩增程序下的特点:

步骤

温度

时间

循环数


程序类型

两步法

三步法

梯度退火

预变性

98°C

3 min

1


速度


中等

变性

98°C

10 sec

15,每个循环降低1℃


特异性

中等

梯度退火

70-55°C

20 sec


PCR产量

中等


中等

延伸

72°C

30 sec/kb


检出率

中等

变性

98°C

10 sec

20



正常退火

55°C

20 sec



延伸

72°C

30 sec/kb



终延伸

72°C

5 min

1



【注】:1. 预变性温度和时间:推荐温度:98°C,时间:3 min,高GC含量模板5-10 min。

2. 退火温度和时间:推荐温度:60°C,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

3. 延伸温度和时间:推荐温度:72°C。时间:30 sec/kb,复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。


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货号

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