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MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit 18461
物品单位 品牌
Yeasen
  • 型号:100T
  • 货号:18461ES60
  • 发布日期: 2022-05-12
  • 更新日期: 2022-05-12
产品详细说明
产地
品牌 Yeasen
货号 18461ES60
用途范围
英文名称
纯度 %
CAS编号
规格 100T
保质期
是否进口

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit

磁珠法残留DNA样本前处理试剂盒(瓶装)

18461ES25

25 T

425.00

18461ES60

100T

1,395.00

产品描述

MolPure® Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit适用于生物制品样本中残留DNA检测的前处理。采用独特的磁珠和精心优化的缓冲体系,可 限度的分离纯化样本中的微量宿主细胞残留DNA。

该前处理试剂盒可与多种宿主细胞DNA残留(qPCR法)检测试剂盒配合使用,包括CHO宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41301)、HEK293宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41302)、Vero宿主细胞残留DNA检测试剂盒(Cat#41303)和E.coli残留DNA检测试剂盒(Cat#41304)。

产品组分

类别

组分编号

组分名称

产品编号/规格

18461ES25(25 T)

18461ES60(100 T)

Part I

18461-A

蛋白酶K(20 mg/mL)

0.5 mL/支×1支

1 mL/支×2支

Part Ⅱ

18461-B

磁珠悬浮液

0.5 mL/支×1支

1 mL/支×2支

18461-C

裂解液

2.5 mL/瓶×1瓶

10 mL/瓶×1瓶

18461-D

结合液

10 mL/瓶×1瓶

40 mL/瓶×1瓶

18461-E

洗涤液A*

6 mL/瓶×1瓶

(需加9 mL乙醇)

24 mL/瓶×1瓶

(需加36 mL乙醇)

18461-F

洗涤液B*

3 mL/瓶×1瓶

(需加12 mL乙醇)

12 mL/瓶×1瓶

(需加48 mL乙醇)

18461-G

洗脱液

2.5 mL/瓶×1瓶

10 mL/瓶×1瓶

Part Ⅲ

18461-H

糖原

225 μL/支×1支

900 μL/支×1支

18461-I

Poly A钾盐

150 μL/支×1支

600 μL/支×1支

运输和保存方法

Part I组分室温运输,4℃可保存1年,长期保存于-20℃。

Part II组分室温运输,室温保存,有效期1年。

Part Ⅲ 组分冰袋运输,-20℃保存1年。

注意事项

1. 注意观察常温保存溶液是否有析出或浑浊(尤其冬季等室温为低温环境时),可37℃水浴至溶液澄清,避免影响使用效果。
2. 洗脱时可能存在磁珠残留,吸取样本时应尽量避免吸入磁珠。

3. 处理样本及加样时,勤换枪头,避免交叉污染。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5. 本产品仅作科研用途!

实验前准备


1. 自备设备和试剂:磁性分离架、杭州奥盛Auto-Pure32A核酸提取仪或其他全自动化提取仪,水浴锅或金属浴,离心机,漩涡振荡器,1.5 mL离心管,无水乙醇等。
2. 使用前,在洗涤液A*和洗涤液B*瓶中加入标签或说明书中注明体积的无水乙醇,充分混匀后使用,并做好标记。每次使用后将瓶盖盖紧,以保持瓶中的乙醇含量。

一、手工提取操作方法

1. 样本处理

a. 待测样本为疫苗等本身含有较高的DNA含量的样本,可用1×PBS(pH=7.4)对样本进行适当比例稀释后提取对样本进行稀释是为了保证检测的准确性,使样本的检测值在标准曲线线性范围之内,通常可考虑进行100倍稀释)

 b. 待测样本为干粉的,可用ddH2O将样本稀释成10 mg/mL或者100 mg/mL后使用。

c. 待测样本为复杂背景基质的,可根据需要进行加标回收实验,以确定合适的样本稀释倍数。

2. 取100 μL样本装于1.5 mL离心管中,加入100 μL裂解液,10 μL蛋白酶K,涡旋混匀10 sec。

  【注】:样本蛋白浓度0-100 mg/mL,蛋白酶K用量为10 μL,样本蛋白浓度100-200 mg/mL,蛋白酶K用量为20 μL。

3. 60℃孵育20 min。

4. 孵育完成后,加入400 μL结合液、9 μL糖原、6 μL Poly A钾盐涡旋混匀。

5. 加入20 μL磁珠,涡旋混匀后,放置10 min,每隔3 min涡旋混匀10 sec。

  【注】:磁珠使用前需涡旋混匀,保证磁珠 重悬。在一次性加样4-5次后,建议再次混匀后再行加样。

6. 短暂离心后,将离心管置于磁力架上静置1-2 min,待磁珠完全吸附,小心吸出液体。

7. 加入500 μL洗涤液A(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),振荡或涡旋混匀,确保磁珠分散,离心管壁无聚集磁珠。

8. 短暂离心后,将离心管置于磁力架上静置1-2 min,待磁珠完全吸附,小心吸取液体。

9. 加入500 μL洗涤液B(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),振荡或涡旋混匀,确保磁珠分散,离心管壁无聚集磁珠。

10.短暂离心后,将离心管置于磁力架上静置1-2 min,待磁珠完全吸附,小心吸取液体。

11.为保证尽量吸出残留液体,可将离心管快速离心10 sec后,置于磁力架上用10 μL移液器吸出残留液体。

12.打开管盖,室温放置3 min直至乙醇完全挥发。观察到磁珠表面无反光或出现裂隙即表明乙醇已挥发完全。

13.将离心管从磁力架上取下,加入50-100 μL 65℃预热的洗脱液,振荡混匀,短暂离心后,65℃孵育5 min,期间可振荡混匀1次。

14.短暂离心后,将离心管放置于磁力架上静置2 min,待磁珠完全吸附,小心将DNA溶液转移至新的离心管中,保存于-20℃,长期保存需放置于-80℃。


二、半自动化提取操作方法
配套自动化仪器使用,以杭州奥盛Auto-Pure32A核酸提取仪为例(如要配套其他主流自动化仪器使用,程序可向翌圣生物科技(上海)股份有限公司获取):

1. 样本处理

a. 待测样本为疫苗等本身含有较高的DNA含量的样本,可用1×PBS(pH=7.4)稀释100倍或1,000倍后提取。

b. 待测样本为干粉的,可用ddH2O将样本稀释成10 mg/mL或者100 mg/mL后使用。

c. 待测样本为复杂背景基质的,可根据需要进行加标回收实验,以确定合适的样本稀释倍数。

2. 取100 μL样本装于1.5 mL离心管中,加入100 μL裂解液,10 μL蛋白酶K,涡旋混匀10 sec。

 【注】:样本蛋白浓度0-100 mg/mL,蛋白酶K用量为10 μL,样本蛋白浓度100-200 mg/mL,蛋白酶K用量为20 μL。

3. 60℃孵育20 min,即为预处理样本,待用。

4. 按照下表向96孔深孔板中加入相应试剂(以杭州奥盛Auto-Pure32A核酸提取仪为例):


板的名称

位置

试剂名称

用量/孔

样品处理板

V1

预处理样本

200 μL

结合液

400 μL

糖原

9 μL

Poly A钾盐

6 μL

漂洗板

V2

洗涤液A*

500 μL

洗涤板/磁珠板

V3

磁珠悬浮液

20 μL

洗涤液B*

500 μL

洗脱板

V6

洗脱液

50-100 μL

【注】:磁珠悬浮液使用前需在涡旋混匀仪上充分重悬或充分颠倒混匀,在一次性加样4-5次后,建议再次混匀后再行加样。

5. 按照提取仪的位置,正确安放上述96孔预装板,并放置96深孔磁棒套。

6. 运行如下程序,程序结束后,将洗脱液转移至新的离心管中,溶液可置于-20℃短期保存,-80℃长期保存。

奥盛Auto-Pure32A的提取仪器的提取程序

步骤

孔位

混合时间(min)

吸磁时间(sec)

等待时间(min)

容积(μL)

混合速度(1-10)

温度(℃)

混合位置(0- )

混合幅度(1- )

吸磁位置(0- )

吸磁速度(1-10)

移磁珠

3

0.2

60

0

500

5

/

0

80

0

1

结合

1

15

90

0

600

5

/

0

80

0

1

清洗1

2

1

60

0

500

8

/

0

80

0

1

清洗2

3

1

60

4

500

8

/

0

80

0

1

洗脱

6

8

90

0

100

10

65

0

80

0

1

弃磁珠

3

0.2

0

0

500

5

/

0

80

0

1


HB220413