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Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina12404ES
物品单位 品牌
Yeasen
  • 型号:12×2 T
  • 货号:12404ES01
  • 发布日期: 2022-04-29
  • 更新日期: 2022-04-29
产品详细说明
产地
品牌 Yeasen
货号 12404ES01
用途范围
英文名称
纯度 %
CAS编号
规格 12×2 T
保质期
是否进口

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格/元

促销价/元

Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (12 Index)

12404ES01

12×2 T

515.00

489.00

Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (96 Index)

12405ES01

96×2 T

4135.00

3928.00

Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (192 Index)

12406ES01

192×1 T

8160.00

7743.84

Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (384 Index)

12407ES01

384×1 T

16320.00

15487.68

产品描述

Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina®Illumina高通量测序平台文库构建专用接头试剂盒,包含二代测序建库中使用的PE adapter以及12/96/192/384种UDI Primer。该试剂盒提供的UDI Primer为I5、I7 Primer预混液,配合DNA Library Prep Kit for Illumina®使用,可构建多达384种双端 Index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证, 程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

产品组分

编号

名称

规格

12404ES01

PE Adapter

84 μL

UDI Primer 0001-0012

10 μL each

12405ES01

PE Adapter

2×336 μL

UDI Primer 0001-0096

10 μL each

12406ES01

PE Adapter

2×336 μL

UDI Primer 0001-0192

5 μL each

12407ES01

PE Adapter

4×336 μL

UDI Primer 0001-0384

5 μL each

运输与保存方法

冰袋运输。所有组分-20°C保存,有效期1年。

注意事项

1)本试剂盒中DNA Adapter的浓度为15 μM,单个文库构建的接头使用量根据所用试剂盒进行调整。

2)本试剂盒提供的PE Adapter为通用型短接头,需要通过PCR扩增获得完整的文库。UDI Primer提供Barcode序列标签,用于高通量测序时区分样品。

3)本试剂盒有四种规格,分别提供12/96/192/384种UDI Primer,可以构建多达384种双端 Index标记文库。

4)切勿加热接头,应在室温让其缓慢溶解,实验室温度 设置为20-25°C。接头避免反复冻融,建议分装保存,可短暂存放于4°C。

5)使用Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina®试剂盒构建的DNA文库结构如下:

图片2.png

6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

7)本产品仅作科研用途!

使用方法

本试剂盒使用方法按照 Hieff NGS ® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina® 试剂盒操作说明进行。

接头连接 (Adapter Ligation)

在末端修复产物两端连接特定的Illumina®接头,即Hieff NGS® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina®操作步骤3.2。

1. 根据Input DNA量按照下表1选择合适的Adapter用量;

1 不同Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA

Adapter : Input DNA摩尔比

推荐Adapter(15 μM)使用量

400 ng

30:1

3.5 μL

300 ng

40:1

3.5 μL

200 ng

60:1

3.5 μL

100 ng

100:1

3.0 μL

50 ng

100:1

1.5 μL

【注】:Input DNA 摩尔数 (pmol)≈Input DNA质量(ng)/[0.66×Input DNA平均长度 (bp)]

2. 将表2中的各种试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用;

3. 配制表2所示反应体系;

2 Adapter Ligation反应体系

名称

体积 (μL)

dA-tailed DNA

60

Ligation Enhancer

30*

Quick T4 DNA Ligase

5

PE Adapter

x**

ddH2O

5-x

【注】:*Ligation Enhancer比较粘稠,请上下颠倒、振荡,充分混匀并瞬时后离心使用。

**本公司接头浓度 (Cat#12404;Cat#12405;Cat#12406;Cat#12407)与常规商业化试剂盒一致,皆为15 μmol/L。

4. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底;

5. 将PCR管置于PCR仪中,设置表3所示反应程序,进行接头连接反应:

3 Adapter Ligation反应程序

温度

时间

热盖

Off

20°C

15 min

4°C

Hold

【注】:Input DNA量较低,实验效果不理想时,可尝试将连接时间延长一倍。

连接产物磁珠纯化 (Post Ligation Clean Up)

该步骤使用磁珠对连接产物进行纯化或分选。纯化可除去未连接的Adapter或Adapter Dimer等无效产物,分选可筛选特定长度DNA的片段以符合测序需要,详细操作步骤参照Hieff NGS® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina®建库试剂盒说明书。

文库扩增 (Library Amplification)

该步骤将对纯化或长度分选后的接头连接产物进行PCR扩增富集,使用本试剂盒接头时,该步骤为必做步骤;

1. 将表4中试剂解冻后颠倒混匀,置于冰上备用

2. 于无菌PCR管中配制表4所示反应体系;

4  PCR扩增反应体系

名称

体积 (μL)

2× Super Canace® II High-Fidelity Mix

25

UDI Primer

5

Adapter Ligated DNA

20

【注】:文库扩增引物来自Yeasen接头引物试剂盒 (Cat#12404;Cat#12405;Cat#12406;Cat#12407)。

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液收集至管底;

4. 将PCR管置于PCR仪中,设置表5所示反应程序,进行PCR扩增

5  PCR扩增反应程序

温度

时间

循环数

98°C

1 min

1

98°C


10 sec

根据实验需要调整

60°C

30 sec

72°C

30 sec

72°C

5 min

1

4°C

Hold

-


HB210809