产品信息

产品描述

DNase I，即Deoxyribonuclease I，中文名称为脱氧核糖核酸酶I，是一种可以消化单链或双链DNA的核酸内切酶。它水解磷酸二酯键，产生含有5'-磷酸基团和3'-OH基团的单脱氧核苷酸和寡脱氧核苷酸。

DNase I 的工作pH范围是7-8，DNase I的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。在Mg2+存在下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；而在Mn2+存在的条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端或有1-2个核苷酸突出的粘末端。

本酶来源于重组 E. coli 菌株，不含RNase，可以用于各种RNA样品的处理。

产品组分

运输和保存方法

干冰运输。-20℃保存，有效期2年。推荐分装保存，避免反复冻融。

产品应用

1.RNA提取：制备不含DNA的RNA；

2.用RNA聚合酶，如T7 RNA Polymerase（Cat#10618）进行体外转录后，用于去除模板DNA；

3.在进行 RT-PCR和RT-qPCR之前制备无DNA的RNA；

4.与DNA Polymerase I（Cat#12903）配合使用，用于缺口平移法标记DNA；

5.用于足迹法进行分析DNA-蛋白质相互作用；

6.生成随机片段文库；

7.细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。

酶活定义

37℃，10 min，完全分解1 μg质粒DNA所需要的酶量。

注意事项

1. DNase I对物理变性敏感，混合时轻轻颠倒试管摇匀，请勿剧烈振荡；

2. 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存；

3. 本产品仅做科研用途；

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

DNase Ⅰ储存溶液

10 mM Tris-HCl（pH 7.6），2 mM CaCl2，50%甘油。

DNase Ⅰ失活或抑制

加入EDTA至终浓度为2.5 mM后，65℃加热10 min可使DNase Ⅰ失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50-100 mM以上盐浓度均对DNase Ⅰ有显著抑制作用。

使用方法（应用于RNA样品中DNA的去除实验，仅供参考）

1. 反应体系：

请使用RNase-free离心管及枪头配制如下反应体系：

2. 反应条件：
37℃，15-30 min后，加入终浓度2.5 mM EDTA溶液混匀后65℃ 10 min。处理后的模板可用于后续RT-PCR或RT-qPCR等。

HB220419