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NHS-Activated MagBeads NHS活化磁珠 20563ES
物品单位 品牌
Yeasen
  • 型号:1 mL
  • 货号:20563ES03
  • 发布日期: 2022-03-31
  • 更新日期: 2022-03-31
产品详细说明
产地
品牌 Yeasen
货号 20563ES03
用途范围
英文名称
纯度 %
CAS编号
规格 1 mL
保质期
是否进口

产品信息

 

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

NHS-Activated MagBeads NHS活化磁珠

20563ES03

1 mL

1545.00

20563ES08

1 mL

4885.00

 

产品描述

 

NHS-Activated MagBeads 是一种预活化的聚合物磁性微球,表面为NHS 基团修饰,能够与含氨基的蛋白或多肽的偶联,其主要用于亲和纯化或者分析检测抗体、抗原和其他生物分子。为任何所需蛋白质偶联到磁珠表面提供了一种便利的方式。与传统的羧基、氨基磁珠相比,表面含NHS基团的磁珠无需事先采EDC/NHS或戊二醛进行活化,只需简单地将含氨基的生物配体溶解于偶联缓冲液中,将蛋白溶液与磁珠孵育2-4h便可将生物配体,通过 NHS-酯化学共价偶联到磁珠上。这一过程不需要危险化学品或冗长的反应方案,具有操作简单、偶联条件温和、生物配体偶联快速高效的优点。

活化的磁珠含有能与伯胺反应以形成稳定的酰胺键的 N-羟基-琥珀酰亚胺 (NHS) 功能基团。一旦它们共价连接,固定的蛋白不会从磁珠表面浸出。在实验中使用制备的磁珠时,非特异性结合可忽略不计,因为在偶联程序中,非反应 NHS-酯基团被彻底封闭。NHS 活化磁珠可通过手动磁力架进行偶联和处理。偶联后,制备的磁珠通常用于亲和纯化程序。

该磁珠适用于含氨基的蛋白、抗体、酶、多肽、核酸等生物分子的共价偶联。偶联后,制备的磁珠可应用于免疫检测、免疫沉淀、免疫共沉淀、蛋白/抗体分离纯化等实验。该产品生物配基偶联效率高,可高效简单偶联且共价偶联稳定,可避免抗体与目标蛋白的共洗脱,其实际使用效果可替代DynaBeads Antibody Coupling kit。

 

产品性质

 

基质

聚合物磁性微球

偶联量

>10 μg IgG/mg 介质

磁珠浓度

10 mg/mL

微球粒径

1 μm

储存缓冲液

100%异丙醇

 

运输保存方法

 

冰袋运输。-20℃储存,有效期2年。

 

注意事项

 

1.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.本产品仅作科研用途!

 

使用方法

 

一、缓冲液配制

所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22 μm0.45 μm滤膜过滤。

清洗液:mM HCI

偶联液:0.2 M NaHCO3, 0.5 M NaCI, pH8.0

封闭液:0.5 M 乙醇胺,0.5 M NaCI, pH8.3  0.1 M Tris, pH8.5

清洗液1:0.1 M乙酸-乙酸钠,0.5 M NaCI, pH3.0

清洗液 2:0.1 M Tris-HCI, 0.5 M NaCI, pH8.0

保护液: PBS , 0.01% Tween-20,0.02% NaN3

偶联液可以选择碳酸盐、磷酸盐等不含氨基的缓冲液体系。缓冲液体系中加入一定浓度的盐离子减少非特异性吸附。

二、样本制备

样品用偶联液溶解,浓度约5-10 mg/ml。

三、抗原偶联

1 .取适量磁珠,吸去保护液,用mM HCI清洗液清洗一次,再用偶联液清洗一次。磁珠加入清洗液混匀后立刻放在磁力架上吸附,吸弃上清。可以选用预冷的溶液快速清洗,减少预活化介质的水解。

溶解好的样品加入至清洗好的磁珠中,磁珠:样品溶液体积比约1:1-2

28°C振荡反应2-4 h4°C过夜。确保磁珠悬浮起来,否则会大大影响偶联效率。

反应完后收集偶联样品,以便检测偶联效率。去离子水清洗磁珠,加入2倍磁珠体积的封闭液,28°C振荡反应h。

偶联后无法用紫外吸收测定上清蛋白浓度,建议用电泳或者BCA定量法检测偶联效率。

将上述反应体系取出,流干其中的封闭液,用3倍磁珠体积的去离子水清洗磁珠,清洗液1、去离子水、清洗液2和去离子水重复冲洗2 次,然后以10 mg/ml的浓度保存在保护液中,于2-8°C保存。

四、纯化流程

以磁珠偶联抗体纯化抗原为例纯化步骤。

4.1缓冲液的准备

】所用水和缓冲液在使用之前建议用0.22 μm0.45 μm滤膜过滤。

平衡/洗杂液:0.15 M NaCI, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0

洗脱液:0.1 M甘氨酸,pH 3.0

中和液M Tris-HCI, pH 8.5

4.2磁珠预处理  将偶联好的磁珠混合均匀,取计算量(根据上样量和磁珠载量计算)的磁珠悬浮液(后文均以100 μL为例),转移至离心管中,放置在磁分离器上,静置大约min待溶液变澄清后,用移液器吸弃上清液。再将离心管从磁分离器上取下来,加入与所取磁珠悬浮液等体积(100 μL)的平衡液,使用枪头反复吹打5次,将离心管置于磁分离器上,大约1min待溶液变澄清后,用移液器吸弃上清液,重复洗涤2次。

4.3样品吸附  在预处理的磁珠中加入样品溶液,漩涡振荡均匀,在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管,使样品和磁珠充分接触并吸附,混合30 min以上,置于磁分离器上,大约1min待溶液变澄清后,吸弃上清液。

4.4洗杂  向离心管中加入初始磁珠悬浮液5倍体积(500 μL的洗杂液,振荡悬浮,混合1-2 min然后置于磁分离器上,大约min待溶液变澄清后,吸弃上清液。该操作重复两次。

4.5洗脱  在上述离心管中加入3-5倍悬浮液体积300-500 μL的洗脱液,用移液器吹打5次,然后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转离心管5-10 min后,置于磁分离器上,大约min待溶液变澄清后,吸取上清液,收集洗脱组分,即为目标蛋白。

4.6洗脱组分中和  向洗脱组分中加入洗脱体积十分之一的中和液,调节pH值至7.0-8.0

4.7磁珠保存  使用后的磁珠用mL洗脱液重悬磁珠,然后置于磁分离器上,大约min待溶液变澄清后,吸弃上清液。该操作重复两次。再加入mL 平衡液,悬浮磁珠,然后置于磁分离器上,大约1min,待溶液变澄清后,吸弃上清液。加入保护液至磁珠浓度为10 mg/mL置于2-8保存。

 

HB220324