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Hieff NGS Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent 12609ES
物品单位 品牌
Yeasen
  • 货号:12609ES24
  • 发布日期: 2022-02-07
  • 更新日期: 2022-02-24
产品详细说明
产地
品牌 Yeasen
货号 12609ES24
用途范围
英文名称
纯度 %
CAS编号
规格 24 T
保质期
是否进口
产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent

快速片段化/末端修复/A尾添加模块

12609ES24

24 T

1462

12609ES96

96 T

5362

12609ES98

1000T

-

产品描述

Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent是针对Illumina®与MGI®高通量测序平台设计的新一代酶切法建库试剂。本品采用高质量的片段化酶,摆脱了繁琐的超声过程,同时简化了操作流程,将片段化模块与末端修复/加A模块合二为一,极大的降低了建库的时间和成本。可应用于500 pg-1 μg常规动植物基因组、微生物基因组等样本,在单管内实现DNA的片段化、末端修复和A尾添加反应。反应产物无需纯化,即可使用Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607)或Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module(Cat#12604)进行文库构建中接头连接反应。

产品组分

组分编号

组分名称

24 T

96 T

1000T

12609

Smearase® Mix

240 μL

960 μL

10mL

运输与保存方法

冰袋运输。

-20℃保存,有效期1年。

注意事项

1)本试剂盒兼容范围为500 pg – 1 μg Input DNA。应尽可能使用A260/A280 = 1.8-2.0的高质量Input DNA。

2)若Input DNA中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐,可能会影响后续实验,建议将DNA稀释在ddH2O或不含EDTA的10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中进行片段化。

3)对于常规的高质量基因组DNA,酶切时间参考表1。本试剂盒片段化偏好低,耐受各种GC含量的模板。

1 常规基因组片段化时间推荐表

插入片段主峰大小

片段化时间

优化范围

600 bp

5 min

3-8 min

350 bp

8 min

5-12 min

250 bp

10 min

8-15 min

200 bp

13 min

10-20 min

150 bp

20 min

12-25 min

【注】:以上为推荐时间,需客户在自己的实验体系中进行微调,以达到最佳效果。

4)参照片段化步骤推荐条件可将DNA酶切为所需大小,为保证优质稳定的片段化效果,片段化过程请于冰上操作。

5)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

6)本产品仅用作科研用途!

使用方法

片段化/末端修复/dA尾添加(DNA Fragment/End Preparation/dA-Tailing)

该步骤将基因组片段化,同时进行末端修复及dA尾添加。

1. 将表2中试剂解冻后,颠倒混匀,置于冰上备用。

2. 于冰上配制表2反应体系。

2  片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应体系

名称

体积(μL)

Input DNA

x

Smearase® Mix

10

ddH2O

Up to 60 μL

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液离心至管底。

4. 将上述PCR管置于PCR仪,设置表3所示反应程序,进行片段化,末端修复及dA尾添加反应。

3  片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应程序

温度

时间

热盖105°C

On

4 °C

1 min*

30 °C

3-20 min**

72 °C

20 min

4 °C

Hold

【注】:*片段化过程为有效控制片段化效果,避免过度酶切,反应程序可预先设置4℃,待模块温度降至4℃时,将PCR管放入PCR仪即可。**对于完整的基因组DNA,酶切时间参考表1。

5. 产物如需纯化,可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads(Cat#12601)或AMPure XP Beads(Cat#A63880)或其他等效产品。也可以直接驳接Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module(Cat#12604)或Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607)试剂盒,进行接头连接。详细说明请见后者的说明书。

参考实例

使用Hieff NGS® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent对小牛胸腺gDNA样本进行酶切,片段化结果见图1。

image.png

1  Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent酶切800 ng小牛胸腺gDNA样本(不同酶切时间片段化效果检测)

HB220118