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FuniCut™ BclI 15004es
物品单位 品牌
yeasen
  • 发布日期: 2021-12-21
  • 更新日期: 2022-01-27
产品详细说明
产地
品牌 yeasen
货号
用途范围
纯度 %
CAS编号
别名
规格
分子式
产品英文名称
是否进口

产品信息

 

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

FuniCut™ BclI

15004ES62

125 T

165.00

 

产品描述

 

FuniCut™系列内切酶是通过基因工程重组技术,可在5~15 min内精确完成DNA切割的快速限制性内切酶,适用于快速切割质粒DNA、PCR产物、基因组DNA等。FuniCut™系列快速内切酶共用一种酶切缓冲液,从而简化了酶切反应体系,另外,有良好的酶活冗余度,可轻松处理底物过量或困难模板的酶切。

 

产品组分

 

组分编号

组分名称

产品规格

15004-A

FuniCut™ BclI

125 μL

15004-B

10×FuniCut™ Buffer

1 mL

15004-C

10×FuniCut™ Color Buffer

1 mL

 

运输与保存方法

 

冰袋运输。-20°C保存,有效期2年。

 

识别位置

 

5'-TGATCA-3'

3'-ACTAGT-5'

 

推荐反应条件

 

1× FuniCut™ 缓冲液;

最适37°C孵育。

 

失活条件

 

80°C孵育20 min。

 

注意事项

 

1)3 h孵育未表现星号活性,延时酶切可能出现星号活性;

2)受Dam甲基化影响,序列完全重叠,剪切阻断;

3)受EcoBI甲基化影响,序列可能重叠,剪切阻断;

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作

5)本产品仅作科研用途!


质量控制

 

1. 功能活性检测:最适反应温度下,在20 μL反应体系中,1 μL酶能够在15 min内完全消化1 μg λDNA (Dam - )。

2. 超长时间孵育检测:最适反应温度下,将1 μL酶与1 μg λDNA (Dam - )共孵育3 h,未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解,但延长孵育时间可能出现星号活性。

3. 酶切-连接-再酶切检测:最适反应温度下,使用1 μL酶消化底物,回收酶切产物,在22°C下使用适量T4 DNA连接酶可以将酶切产物重新连接,将连接产物再次回收后,使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

 

使用方法

 

1. DNA快速酶切流程

1)按如下建议的加样顺序配制体系反应液(冰上操作):

组分

质粒DNA

PCR产物

基因组DNA

ddH2O

15 μL

16 μL

30 μL

10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer

μL

3 μL*

5 μL

底物DNA

μL(~1 μg)

10 μL (~0.2 μg)

10 μL (5 μg)

FuniCut™ BclI

μL

1 μL

5 μL

Total

20 μL

30 μL

50 μL

*本体系指已纯化后的PCR产物。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度,10×FuniCut TM Buffer加入量可适当减少至2 μL。若下一步进行克隆等实验,酶切前需纯化PCR产物。

2)轻柔吸打或轻弹管壁以混匀(切勿涡旋),然后瞬时离心以收集挂壁液滴。

3)37°C孵育15 min(质粒),或15~30 min(PCR 产物),或30~60 min(基因组 DNA)。

4)80°C孵育20 min即可使酶失活,停止反应(可选)。

2. 双酶切或多酶切

1)每种内切酶的用量为1 μL,并根据需要适当扩大反应体系。

2)所有内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10。

3)如果选用的几种内切酶的最适反应温度不同,应先以最适温度低的酶开始酶切,再添加最适温度较高的酶,以较高的温度进行孵育。

3.质粒的扩大反应体系

组分

体积(20 μL

体积(20 μL

体积(50 μL

DNA

1 μg

2 μg

5 μg

FuniCut™ BclI

μL

2 μL

5 μL

10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer

μL

2 μL

5 μL

Total

20 μL

20 μL

50 μL

:如果总反应体系大于20 μL,可使用水浴、金属浴或沙浴,并增加孵育时间。

不同DNA中的识别位点数

λDNA

ΦX174

pBR322

pUC57

pUC18/19

SV40

M13mp18/19

Adeno2

8

0

0

0

0

1

0

5

甲基化修饰影响

Dam

Dcm

CpG

EcoKI

EcoBI

序列完全重叠

剪切阻断

无影响

无影响

无影响

序列可能重叠

剪切阻断

不同反应缓冲液中的活性

反应缓冲液

FuniCut™

Buffer

Thermo Scientific

Fast Digest Buffer

NEB

CutSmart® Buffer

Takara

QuickCut™ Buffer

活性

100%

100%

100%

100%

:活性数据来自翌圣生物限制酶标准反应体系下的检测。

同裂酶

BsiQI, FbaI, Ksp22I

:同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

 

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