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一步快速去除核糖体RNA试剂盒(人) 12259es
物品单位 价格 品牌
3165 Yeasen
  • 产地:上海
  • 型号:8 T/盒
  • 货号:12259ES08
  • 发布日期: 2021-09-24
  • 更新日期: 2022-03-24
产品详细说明
产地 上海
品牌 Yeasen
货号 12259ES08
用途范围
纯度 %
CAS编号
规格 8 T/盒
是否进口

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格/元

Hieff NGS® One-Step rRNA Removal Kit (Human,1-100 ng)

一步快速去除核糖体RNA试剂盒(人)

12259ES08

8 T

3165

12259ES24

24 T

11365

12259ES96

96 T

37365

产品描述

Hieff NGS® One-Step rRNA Removal Kit (Human,1-100 ng)利用靶向技术在cDNA合成过程中高特异性地抑制人总RNA中的核糖体RNA的逆转录,而不影响信使RNA (mRNA)、非编码RNA以及环状RNA等非靶RNA的cDNA合成,从而在一链cDNA合成过程中高特异性去除核糖体RNA。这种靶向去除技术相较于传统的RNase H消化法具有耗时短 (3 min)、操作简单(一步操作)和非靶RNA保留完整等优点,极大简化了操作流程和提高了建库效率,可以与市面上各类一链cDNA合成试剂配套。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA(如FFPE RNA)均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA去除所获得的cDNA样本可用于高通量测序分析mRNA和非编码RNA,可显著提高测序结果中有效数据比例,也可用于其它cDNA下游应用。提供的试剂已经过严格的质量控制和功能验证, 程度上保证了rRNA去除的稳定性和重复性。

适用范围

适用于人来源的1-100 ng 总RNA样品;适用于完整或部分降解RNA(如FFPE RNA)样品。

产品组分

产品组份

12259ES08

12259ES24

12259ES96

One-Step rRNA Removal Mix

8 μL

24 μL

96 μL

运输与保存方法

干冰运输,-20°C存放效期两年。

注意事项

一、 关于操作

1. 请使用无RNase污染的耗材,并对实验区域定期进行清理,推荐使用Thermo Fisher公司的RNAZap™ 高效核酸去除喷雾去除RNA酶污染。

2. RNA样品应不含基因组DNA污染,若样品中有gDNA残留,应先进行DNase I消化并纯化后再用于本试剂盒。

3.若样品体积较大,可先进行浓缩。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

5. 本产品仅作科研用途!

二、自备材料

1. qRT-PCR质检rRNA去除效率:Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox) (Cat#11201)或其他等效产品;

2. 其他材料:无菌超纯水、低吸附枪头、PCR管、PCR仪等。

使用方法

、操作流程

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1. 使用快速去除核糖体RNA试剂盒+RNA建库试剂盒进行RNA建库流

、操作步骤

方案1:在逆转录体系中去除rRNA。

1. 使用翌圣生物的Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Cat#11119)进行本试剂盒rRNA去除效率测试,其他逆转录试剂盒也可以用于本测试。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

RNA不片段化体系


RNA段化体系

Total RNA

1-100 ng


Total RNA

1-100 ng

Random Primers N6 (50 μM)

1 μL


Random Primers N6 (50 μM)

1 μL

One-Step rRNA Removal Mix

1 μL


One-Step rRNA Removal Mix

1 μL

RNase free ddH2O

To 14 μL


5×Hifair® Ⅱ Buffer

4 μL

混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:


RNase free ddH2O

To 18 μL

75℃

1 min


混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:

50℃

2 min


94℃(片段化温度和时间可根据需求自行调整)

5 min

4℃

Hold


75℃

1 min




50℃

2 min

上述反应体系

14 μL


4℃

Hold

5×Hifair® Ⅱ Buffer

4 μL




Hifair® Ⅱ Enzyme Mix

2 μL


上述反应体系

18 μL

Total

20 μL


Hifair® Ⅱ Enzyme Mix

2 μL

混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:


Total

20 μL

25℃

5 min


混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:

42℃

30 min


25℃

5 min

85℃

5 min


42℃

15 min




85℃

5 min

3. qPCR检测rRNA去除效果。


1630994874207238.png

2.qPCR验证一步rRNA快速去除试剂盒的去除效果

方案2:在RNA NGS文库构建中去除rRNA。

1. 使用翌圣生物的Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit (Cat#12252 for Illumina, 13333 for MGI)进行本试剂盒rRNA去除效率测试。

RNA段化

组份

体积

Total RNA

1-100 ng

2×Frag/Prime Buffer

8.5 μL

One-Step rRNA Removal Mix

1 μL

DEPC H2O

to 17 μL

混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:

温度

时间

94℃(片段化温度和时间可根据需求自行调整)

5 min

75℃

1 min

50℃

2 min

4℃

Hold



组份

体积

上述反应体系

17 μL

Strand Specificity Reagent

6 μL

1st Strand Enzyme Mix

2 μL

Total

25 μL

混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:

温度

时间

25℃

10 min

42℃

15 min

70℃

15 min

接Step 2 链cDNA的合成/末端修复/加A


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3. 二代测序验证一步rRNA快速去除试剂盒的去除效果

2. 使用New England Biolabs的NEBNext Ultra II Directional RNA Library Prep Kit for Illumina (Cat#E7760)联合本试剂盒进行rRNA去除方案

RNA段化

组份

体积

Total RNA

1-100 ng

First Strand Synthesis Reaction Buffer (5×)

4 μL

Random Primers

1 μL

One-Step rRNA Removal Mix

1 μL

DEPC H2O

to 10 μL

混匀后瞬离,按照下列反应程序进行反应:

温度

时间

94℃(片段化温度和时间可根据需求自行调整)

5 min

75℃

1 min

50℃

2 min

4℃

Hold

接下游一链合成体系

3. 其他品牌RNA 建库试剂盒请咨询!


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