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Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module 12608es
物品单位 品牌
Yeasen
  • 产地:China
  • 发布日期: 2021-06-04
  • 更新日期: 2022-01-30
产品详细说明
产地 China
品牌 Yeasen
货号
用途范围
纯度 %
CAS编号
别名
规格
分子式
产品英文名称
是否进口

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module

快速末端修复/A尾添加模块

12608ES24

24 T

3865.00

12608ES96

96 T

11765.00


产品描述

Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module是针对Illumina®高通量测序平台文库构建而专业设计的DNA末端修复/A尾添加模块,具有高效、快速、易实现自动化的优势。本产品兼容1 ng-1 μg片段化Input DNA,可在单管内实现片段化DNA的末端补平、5'端磷酸化和3'端加A尾反应,得到5'末端含磷酸基团且3'末端带有dA突出的DNA产物。该产物无需纯化,即可使用Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607)进行文库构建接头连接反应。

本产品已与Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607),2×Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification(Cat#12620)共同用于DNA文库构建,通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分均经过严格质检,最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。


产品组分

组分编号

组分名称

24 T

96 T

12608-A

End Repair/dA-Tailing Buffer

144 μL

576 μL

12608-B

End Repair/dA-Tailing Enzyme

96 μL

384 μL

质量控制

Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Enzyme 

1. SDS-PAGE纯度:>95%。

2. 核酸内切酶活性:50 μL反应体系中加入10 μL本酶和1 μg φX174 RF I DNA,37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,RF II转化比率<10%。

3. 磷酸酶活性:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入10 μL本酶和2.5 mM对硝基苯磷酸,37°C孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。

4. 功能活性:在1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Enzyme中加入1 μL本酶和0.5 μg包含5'和3'突出末端的片段化DNA,25°C孵育20分钟。经毛细管电泳检测,末端修复、加dA尾并磷酸化的DNA比率>95%。

Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer

1. 16小时孵育检测:50 μL反应体系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg HindIII-λDNA,37°C孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解;50 μL反应体系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg T3 DNA,37°C孵育16小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,条带无降解。

2. 核酸内切酶活性:50 μL反应体系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg φX174 RF I DNA,37°C孵育4小时。经琼脂糖凝胶电泳检测,RF II转化比<10%。

3. RNase活性:在1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer中加入40 ng FAM-RNA,37°C孵育16小时。经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,条带无降解。

4. 磷酸酶活性:在磷酸酶活性检测缓冲液中加入1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和2.5 mM对硝基苯磷酸,37°C下孵育4小时。经光谱测定法检测,405 nm处无对硝基苯阴离子特征吸收峰。


测序验证

本品与Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module(Cat#12607),2×Hieff Canace® High-Fidelity Mix for Library Amplification(Cat#12620)共同用于DNA文库构建,已通过Illumina®高通量平台测序验证其有效性。


运输与保存方法

冰袋运输。

-20℃保存,有效期1年。


注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用方法

1. 将表1中各试剂解冻后,颠倒混匀,置于冰上备用。

2. 于无菌PCR管中配制表1所示反应体系。

表1 末端修复/dA尾添加PCR反应体系

名称

体积(μL)

Fragmented DNA

x

End Repair/dA-Tailing Buffer

6

End Repair/dA-Tailing Enzyme

4

ddH2O

Up to 60 μL

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀,并短暂离心将反应液离心至管底。

4. 将上述PCR管置于PCR仪,设置表2所示反应程序,进行末端修复/dA尾添加反应。

表2 末端修复/dA尾添加PCR反应程序

温度

时间

热盖105°C

On

30°C

20 min

72°C

20 min

4°C

Hold

5. 产物如需纯化,可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads(Cat#12601)或AMPure XP Beads(Cat#A63880)或其他等效产品。


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产品编号

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12200ES24/96

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产品编号

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产品编号

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12615ES04/16

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12616ES04/16

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12617ES04/16

12×4/12×16 T

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12618ES04/16

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12610ES96

96 T

1365

建库模块

产品编号

规格

价格(元)

Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module

12607ES08/24/96

8/24/96 T

1423/3263/10863

Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module

12608ES24/96

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12250ES24/96

24/96 T

4885/16485

文库定量

产品编号

规格

价格(元)

Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina®, qPCR Master Mix

12302ES05

500 T

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多重PCR

产品编号

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875/3165

 

HB190103