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HiSep DEAE Agarose Resin 6FF(HiSep DEAE弱阴离子高速交换树脂)20540ES
物品单位 价格 品牌
258 Yeasen
  • 产地:China
  • 货号:20540ES25
  • 发布日期: 2020-03-20
  • 更新日期: 2022-01-30
产品详细说明
产地 China
品牌 Yeasen
货号 20540ES25
用途范围 蛋白纯化
纯度 %
CAS编号
规格 25ml
是否进口

产品信息

产品名称      

产品编号

规格

储存

价格(元)

HiSep DEAE Agarose   Resin 6FF (HiSep DEAE弱阴离子高速交换树脂)

20540ES25

25ml

4℃

258.00

HiSep DEAE Agarose   Resin 6FF (HiSep DEAE弱阴离子高速交换树脂)

20540ES60

100ml

4℃

648.00

HiSep DEAE Agarose   Resin 6FF (HiSep DEAE弱阴离子高速交换树脂)

20540ES75

300ml

4℃

1538.00


产品描述

离子交换树脂主要包括强酸性阳离子交换树脂、弱酸性阳离子交换树脂、强碱性阴离子交换树脂和弱碱性阴离子交换树脂4种,广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化。

本品DEAE弱阴离子交换树脂以高度交联的6%琼脂糖为介质,可耐受较高的流速及更高的化学稳定性,适合实验室及工业大规模纯化。本品离子交换基团-O-CH2CH2-N (C2H5)2。


产品性质

基质(Matrix)

高度交联的6%琼脂糖微球

粒径(Bead size)

45-165μm

离子交换类型(Type)

弱阴离子

载量(Capacity)

~0.11-0.16mmol Cl-/ml   基质

流速(Flow Rate)

300-600cm/h

pH范围(pH Range)

2-12

储存缓冲液(Buffer)

20%乙醇


运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存,有效期2年。


使用方法

1 缓冲液的准备

所用水和Buffer在使用前*用0.22μm或0.45μm滤膜 过滤。

2 样品准备

样品在使用前*用0.22μm或0.45μm滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。

3 装柱(使用储液器装填)

1)用去离子水冲洗层析柱底筛板与接头,确保柱底筛板上无气泡,关闭柱底出口,并在柱底部留出1-2cm的去离子水。

2)将树脂悬浮起来,小心的将浆液连续地倒入层析柱中。用玻璃棒沿着柱壁倒入浆液可减少气泡的产生。
3)如果使用储液器,应立即在层析柱和储液器中加满水,将进样分配器放置于浆液表面,连接至泵上,避免在分配器或进样管中产生气泡。
4)打开层析柱底部出口,开起泵,使其在设定的流速下进行。最初应让缓冲液缓慢流过层析柱,然后缓慢增加至最终流速, 这样可避免液压对所形成柱床的冲击,也可以避免柱床形成的不均匀。如果达不到推荐的压力或流速,可以用你所使用泵的*流速, 这样也可以得到一个很好的装填效果(【注】:在随后的色谱程序中,不要超过*装柱流速的75%)。当柱床高度稳定后,在*的装柱流速下至少再上3倍柱床体积的去离子水。标上柱床高度。

5)关闭泵,关闭层析柱出口。

6)如果使用储液器,去除储液器,将分配器至于层析柱中。

7)将分配器推向柱子至标记的柱床高度处。允许装柱液进入分配器,锁紧分配器接头。

8)将装填好的层析柱连接至泵或色谱系统中,开始平衡。如果需要可以重新调整分配器。

4 样品纯化
1)将介质装入合适的层析柱,层析用5倍柱体积的结合Buffer进行平衡,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
2)将样品加到平衡好的HiSep DEAE Agarose Resin 6FF中(保证目的蛋白与Resin充分接触,提高目的蛋白的回收率),收集流出液。

3)用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。

4)使用5-10倍柱体积的洗脱Buffer,收集洗脱液,即目的蛋白组分。
5)依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,*再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4度保存,防止填料被细菌污染。

5  SDS-PAGE 检测

将得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用SDS-PAGE 检测纯化效果。

6 填料清洗

离子交换树脂每次使用后可以用1M NaCl 甚至更高离子强度溶液或高pH溶液清洗,然后用至少5倍柱体积的Buffer 进行平衡至离子强度或pH值稳定。

CIP(Cleaning In Place)清洗

离子交换树脂可以重复使用而无需再生,但随着非特异性结合的蛋白的增多和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,这时可按照下面方法对树脂进行清洗。

1)去除一些沉淀或变性物质

用2倍柱体积的1M NaOH 溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。

2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质

用3-4倍柱体积的70%乙醇或3-4倍柱体积的1% Triton™ X-100 清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH7.4清洗。

3)去除一些离子键结合物质

用3-4倍柱体积的2M NaCl清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS, pH 7.4清洗。


注意事项

1)请勿冷冻保存本产品。

2)Resin使用前一定要充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。

3)所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

附表 问题及解决方案

问题

可能原因

推荐解决方案

柱子反压过高

填料被堵塞

按照【填料清洗】部分对树脂进行清洗。

样品中含有微小的固体颗粒,建议使用前用0.22μm或0.45μm滤膜过滤。

洗脱样品较杂

树脂重复多次使用

按照【填料清洗】部分对树脂进行清洗或更换新树脂。

平衡不充分

增加平衡液体积,确保树脂充分平衡/洗杂。