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MBP标签蛋白纯化预装柱,1 ML 20516ES
物品单位 价格 品牌
358 Yeasen
  • 产地:China
  • 货号:20516ES03
  • 发布日期: 2020-03-20
  • 更新日期: 2022-01-30
产品详细说明
产地 China
品牌 Yeasen
货号 20516ES03
用途范围
纯度 %
CAS编号
规格 1 mL
是否进口

产品信息

产品名称      

产品编号

规格

储存

价格(元)

MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1ML

MBP标签蛋白纯化预装柱,1   ML

20516ES03

1 mL

4℃

358.00

20516ES08

5×1 mL

4℃

1258.00


产品描述

      MBPSep Dextrin Agarose Resin 是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白的亲和层析介质,MBP可促进连接蛋白的正确折叠,增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白,结合的融合蛋白可以用10 mM麦芽糖进行温和洗脱,保护了目的蛋白的活性,MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。
此外,MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,具有更高的物理化学特性,可以耐受更高的压力,在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化,更适于工业大规模蛋白的纯化。

MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1ML是装填了MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF的一种中压预装柱,规格1 mL,预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如?KTA等,方便客户操作。


产品性质

基质(Matrix)

高度交联的6%琼脂糖微球

配体(Ligand)

糊精

粒径(Bead size)

45-165 μm

载量(Capacity)

>10 mg MBP蛋白(80 kDa)

*压力(PressureMax)

0.3 MPa, 3 bar

pH稳定范围(pH range)

3-12

储存缓冲液(Buffer)

20%乙醇


运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存,有效期2年。

需准备试剂

所用水和Buffer在使用前*用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤除菌。

结合/洗杂缓冲液:20 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1 mM EDTA,  pH 7.4

洗脱缓冲液:20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA,10 mM 麦芽糖, pH 7.4

注:结合/洗杂缓冲液或者洗脱缓冲液中可加入1 mM  DTT或10 mM β-巯基乙醇。


使用方法

注:样品在上样前*用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子。


1样品纯化(以Akta为例)

1)准备:将泵管道中注满去离子水。去掉上塞子,将层析柱连接至色谱系统中。再折断下口,将预装柱接到色谱系统中,并旋紧。

2)清洗:3-5倍柱体积去离子水冲洗层析柱中储存液。

3)平衡:用5倍柱体积的结合Buffer平衡层析柱,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。
4)上样:将样品加到平衡好的层析柱中,推荐流速1 mL/min,保证目的蛋白与树脂充分接触,提高目的蛋白的回收率,收集流出液,待检测。
:样品的粘度增加使得即使上样体积很少,也会导致层析柱很大的反压。上样量不要超过柱子的结合能力。大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。
5)洗杂:用10-15倍柱体积的洗杂Buffer进行清洗,直到紫外吸收达到一个稳定的基线,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液,待检测。
6)洗脱:用洗脱Buffer采用一步法或线性梯度洗脱。一步洗脱中,通常5倍柱体积洗脱液足够将目的蛋白洗脱下来。也可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多,来分离不同结合强度的蛋白质。
7)清洗及保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,*再用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%的乙醇中,置于4℃保存,防止填料被细菌污染。


2 SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。


3 填料清洗

随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集,会造成流速和结合载量性能下降,此时需对填料进行清洗。

1)3倍柱体积的去离子水;

2)3倍柱体积的0.1%SDS或0.5 M NaOH溶液;

3)3倍柱体积去离子水;

4)3倍柱体积20%乙醇,保存于4℃。


注意事项

1)请勿冷冻保存本产品。

2)所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。

3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

附表 问题及解决方案

问题

可能原因

推荐解决方案

柱子反压过高

填料被堵塞

清洗树脂。

裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上样前*用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤,或离心去除。

洗脱组分中无目的蛋白

目的蛋白未表达

优化实验方案,确保目的蛋白表达

样品或缓冲液中存在一些干扰因素如非离子去污剂

样品透析或用结合buffer稀释

细胞产生大量的淀粉酶影响结合力

培养基中添加葡萄糖,抑制淀粉酶的表达

融合蛋白使麦芽糖结合位点阻塞或扭曲影响了目的蛋白的结合力

更换载体

柱子结合时间太短

将样品与树脂振荡孵育4℃ 2 h或更长时间

洗脱样品较杂

目的蛋白降解

加一些蛋白酶抑制剂,如PMSF、EDTA等

平衡/洗杂不充分

增加平衡液体积,确保树脂充分平衡/洗杂。


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