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GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂 20507ES
物品单位 价格 品牌
928 Yeasen
  • 产地:China
  • 货号:20507ES10
  • 发布日期: 2020-03-20
  • 更新日期: 2020-03-20
产品详细说明
产地 China
品牌 Yeasen
货号 20507ES10
用途范围
纯度 %
CAS编号
规格 10 mL
是否进口

产品信息

产品名称      

产品编号

规格

储存

价格(元)

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂(用于GST标签蛋白纯化)

20507ES10

10 mL

4℃

928.00

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂(用于GST标签蛋白纯化)

20507ES50

50 mL

4℃

3848.00

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂(用于GST标签蛋白纯化)

20507ES60

100 mL

4℃

6898.00

GSTSep Glutathione Agarose Resin 谷胱甘肽琼脂糖树脂(用于GST标签蛋白纯化)

20507ES80

1000 mL

4℃

48686.00


产品描述

GSTSep Glutathione Agarose Resin是一种GST标签蛋白纯化树脂,结构上以4%琼脂糖凝胶为基质,通过12个原子的间隔臂,用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成。该设计使树脂的纯化效率得到了较大提高,使其每毫升基质可承载>20 mg GST融合蛋白。

此外,本品特异性好,性价比高,可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。


产品性质

基质(Matrix)

4%琼脂糖微球

配体(Ligand)

通过12原子间隔臂偶联的谷胱甘肽

粒径(Bead   size)

45-165 μm

载量(Capacity)

>20 mg GST protein/mL基质(40   kDa)

*压力(PressureMax

0.1 MPa,1 bar

pH稳定范围(pH   range)

3-12

储存缓冲液(Buffer)

20%乙醇


运输和保存方法

冰袋运输。4℃保存,有效期2年。

需准备试剂

所用水和Buffer在使用前*用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤除菌。

结合/洗杂缓冲液:PBS,pH 7.4(140 mM NaCl,2.7 mM KCl,10 mM Na2HPO4,1.8 mM KH2PO4,pH 7.4)

洗脱缓冲液:50 mM Tris-HCl,10 mM 还原型谷胱甘肽,pH 8.0

注:结合/洗杂缓冲液或者洗脱缓冲液中可加入1-10 mM DTT。

 

使用方法

注:样品在上样前*用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤,减少杂质以防阻塞柱子。


1.样品纯化

1)装柱:将GSTSep Glutathione Agarose Resin装入合适的层析柱,注意避免产生气泡。
2)平衡:用5倍柱体积的结合Buffer平衡柱子,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。

3)上样:Resin平衡后,加入蛋白样品,使其与Resin充分接触,提高目的蛋白回收率,收集流出液。

4)洗杂:用10-15倍柱体积的洗杂缓冲液进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。

5)洗脱:使用5-10倍柱体积的洗脱缓冲液,收集洗脱液,即目的蛋白溶液。
6)清洗与保存:依次使用3倍柱体积的结合Buffer和5倍柱体积的去离子水平衡填料,*用5倍柱体积的20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的20%乙醇中,置于4℃保存,防止填料被细菌污染。


2. SDS-PAGE检测

将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。


3. 填料清洗

GST标签蛋白纯化产品可以重复使用而无需再生,但随着非特异结合蛋白的增多和蛋白的聚集,会造成流速和结合载量性能下降,此时需对填料进行清洗。

1)去除一些沉淀或变形物质

用2倍柱体积的6 M盐酸胍溶液进行清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS,pH 7.4清洗。

2)去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质
用3-4倍柱体积的70%乙醇或2倍柱体积1% Triton X-100清洗,然后立即用5倍柱体积的PBS,pH 7.4清洗。


注意事项

1)请勿冷冻保存本产品。

2)GSTSep Glutathione Agarose Resin使用前一定要充分颠倒若干次,使琼脂糖珠混合均匀。

3)所有操作过程中,样本需要在4℃或冰上操作。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


附表 问题及解决方案


问题

可能原因

推荐解决方案

柱子反压过高

填料被堵塞

清洗树脂

裂解液中含有微小的固体颗粒,建议上样前*用0.22 μm或0.45 μm滤膜过滤,或离心去除

样品太黏稠

样品中含高浓度的核酸,延长破碎时间直至粘度降低,或添加DNaseI (终浓度为5 μg/mL),Mg2+(终浓度1 mM),冰上孵育10-15 min

缓冲液太黏稠

有机试剂或蛋白稳定试剂(如甘油等)可能会引起反压增高,降低操作流速

洗脱组分中无目的蛋白

GST标签蛋白变性了

使用温和的裂解条件,实验条件以经验为准。

过度的裂解使目的蛋白变性

目的蛋白聚集产生沉淀

在细胞裂解前溶液中加入DTT,终浓度为1-10mM

融合蛋白改变了GST的构象,影响了目的蛋白的结合力

测定pGEX中GST的结合力,对载体进行超声处理,检测其结合力。如果载体中GST有很高的亲和力,有可能是改变融合蛋白的构象从而降低了GST标签蛋白的亲和力

降低结合温度至4℃,充分清洗

柱子平衡时间太短,目的蛋白不是在pH 6.5-pH 8.0范围内结合

用PH 6.5-pH 8.0的buffer进行充分的平衡,如PBS

目的蛋白没有完全洗脱下来

洗脱体积太少

增加洗脱液体积,减小洗脱流速

洗脱液中谷胱甘肽浓度太低

增加洗脱液中谷胱甘肽浓度,可尝试用50 mM Tris-HCl,20-40 mM还原型谷胱甘肽pH8.0洗脱

低pH影响洗脱

在不增加洗脱液中谷胱甘肽量时,提高洗脱液中pH至pH 8-9会有改善

增加洗脱液中离子强度,如0.1-0.2 M NaCl

洗脱液中谷胱甘肽被氧化

使用新鲜配制的洗脱液

加入DTT

非特异性疏水作用影响目的蛋白的溶解和洗脱

洗脱液中加入非离子型洗涤剂,如0.1%的Triton X-100或者2%正辛基-β-D-吡喃葡糖苷Tween-20

电泳或Western Blot检测中发现多 条带

Mr 70000蛋白与目的蛋白一起纯化下来

Mr 70000蛋白可能是大肠杆菌基因DnaK的产物,可以在目的蛋白中加入50 mM Tris-HCl,2 mM ATP,10 mM MgSO4,pH 7.4在37℃加热10 min去除

可通过ATP-琼脂糖胶或离子交换来去除目的蛋白溶液中的dnaK蛋白

GST融合蛋白已经发生降解

在裂解液中加入蛋白酶抑制剂,如加入1 mM PMSF

可能是蛋白酶对目的蛋白部分降解造成的,可使用蛋白酶缺陷型宿主菌(如lon-或ompT)

细胞破碎过度

减少细胞破碎时间,超声前加入溶菌酶(菌液体积的0.1倍10 mg/mL溶菌酶,25   mM Tris-HCl,pH 8.0),避免发泡导致蛋白酶变性,过度超声破碎增加宿主内源蛋白与GST融合目的蛋白的共纯化

共价共纯化

包括促进蛋白正确折叠的分子伴侣的共纯化,如:DnaK(Mr~70000),DnaJ(Mr~37000),GrpE(Mr~40000),GroEL(Mr~57000),GroES(Mr~10000)

抗体与E. coli的各种蛋

白反应

抗体吸附E. coli蛋白:GST-抗体;超声处理去除GST抗体,可以用Western Blot检测