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碱性磷酸酶活性检测试剂盒 21101ES
物品单位 价格 品牌
856 Yeasen
  • 产地:China
  • 货号:21101ES60
  • 发布日期: 2020-03-20
  • 更新日期: 2022-02-07
产品详细说明
产地 China
品牌 Yeasen
货号 21101ES60
保存条件 -20℃
用途范围
纯度 %
CAS编号
规格 100T
保质期 一年
是否进口

产品信息

产品名称

货号

规格

储存

价格(元)

Alkaline Phosphatase Activity Detection Kit 碱性磷酸酶活性检测试剂盒

21101ES60

100T

-20℃

856.00


产品描述

碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,简写为ALP或AKP),又称碱性磷酸酯酶,是一组同工酶,目前已发现六种ALP1-ALP6。广泛分布于人体*、骨骼、肠、肾和胎盘等组织,是经*向胆外排出的一种酶。碱性条件下可催化磷酸酯键的水解,从而将底物分子上的磷酸基团去除,转化为羟基。此类底物包括核酸(DNA、RNA)、蛋白、生物碱等。常见的有肠道碱性磷酸酶、非组织特异性碱性磷酸酶、胎盘碱性磷酸酶等;生物学中碱性磷酸酶(ALP)水平的变化及其活性的高低常被作为一种检测组织行为的指标,如:1)作为iPS成功诱导的标志;ALP在大多数细胞类型中均有表达,但是在iPS细胞内的表达水平明显升高;2)结肠癌细胞分化程度定性和定量的指标;3)血清中碱性磷酸酯酶的升高可导致高碱性磷酸酶血症,常被认为和恶性胆管阻塞,原发性硬化胆管炎,肝癌,肝硬化等肝胆疾病密切相关;4)血清中碱性磷酸酶活性升高还和骨骼损伤导致的骨生成,以及骨骼疾病如纤维骨炎、佝偻病、成骨不全等密切相关;5)碱性磷酸酶水平也会出现一些病理性降低的情况,多见于重症慢性肾炎、儿童甲状腺机能不全、贫血等。对于正常成人来说,血清内ALP的范围为40-150U/L。

对硝基苯磷酸(p-nitrophenyl phosphate, pNPP)是一种常用的磷酸酶显色底物,碱性条件下,可在ALP作用下生成对硝基苯酚(p-nitrophenol, pNP),后者在碱性环境下呈黄色产物,并在405nm处可检测到*吸收峰。产物黄色越深,说明ALP活性越高,反之则活性越低。因此,通过检测OD405吸光值即可计算ALP活性水平。

本品为碱性磷酸酶活性检测试剂盒,可快速、便捷地检测细胞或组织裂解液/匀浆液、血清、血浆、尿液、纯化酶等样品中的ALP活性。该试剂盒包括标准品和空白对照,可进行达100个样品的检测。


产品组分

组分编号

组分名称

产品规格(100T)

储存方法

21101-A

ALP反应缓冲液 ALP Assay Buffer

15ml

-20℃

21101-B

显色底物 pNPP Substrate

2管

-20℃避光

21101-C

pNP标准品溶液p-nitrophenol Standard

100ul (10mM)

-20℃避光

21101-D

反应终止液 Stop Solution

12ml

-20℃


保存条件

冰袋运输。-20℃保存,一年有效。其中显色底物、pNP标准溶液需要避光保存。


注意事项

1)如果进行酶活力的*定量,进行酶反应时必须注意精确计时。此时推荐孵育30min等较长时间,以减小操作过程中的时间误差。如果样品中酶活性较高,则可以预先适当稀释样品。

2)样品溶液中须避免出现EDTA、氟离子、柠檬酸盐等碱性磷酸酶抑制剂。

3)ALP反应缓冲液和p-nitrophenol标准品溶液对人体有害,请注意适当防护。反应终止液有腐蚀性,请小心操作。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用说明

1. 试剂准备

将所有试剂取出,恢复至室温使用。

1)显色底物溶液:取一管显色底物,溶解于2.5mL的ALP反应缓冲液中,充分溶解和混匀,冰上放置。注意:新鲜配制的显色底物溶液需在数小时(≤ 6h)内使用。

2)标准品工作液:取10μL p-nitrophenol标准品溶液(10mM),用ALP反应缓冲液稀释至0.2mL,使得终浓度为0.5mM。

2. 样品准备

1)细胞或组织裂解液的准备:采用适当细胞或组织裂解液裂解细胞和组织,如果有必要需进行适当匀浆,随后离心取上清,用于ALP活性的检测。

     注:裂解液中不能含有磷酸酶抑制剂。样品可以-80℃冻存,避免反复冻融。

2)血浆、血清和尿液的准备:血浆和血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定,但为了消除样品本身颜色的干扰,需设置加了血浆或血清但不加底物的对照。

     注:血浆制备不能用含EDTA和柠檬酸盐的抗凝管。尿液通常也可以直接用于测定。上述样品可以-80℃冻存,避免反复冻融。

3)样品的稀释:若样品中含有较高活性的ALP,可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释,也可以采用试剂盒中的ALP反应缓冲液进行稀释。若使用上述反应缓冲液进行稀释,需保留足够的缓冲液用于试剂盒的检测过程。

3. 加样

参考下表使用96孔板设置空白对照孔、标准品孔和样品孔。标准品的用量分别为4、8、16、24、32和 40μL,样品通常可以直接加50μL。如果样品中的碱性磷酸酶活性过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

表1 各组分加样数据表


空白对照(Blank)

标准品(Standard)

样品(Sample)

ALP反应缓冲液

50μL

(100-x)μL

(50-y) μL

显色底物

50μL

50μL

样品

yμL

标准品工作液

xμL

4. 混匀:用枪头轻轻吹打混匀,也可借助摇床进行混匀。
5. 孵育:37℃孵育5-10min。(待测样品中ALP活性较低时,可适当延长孵育时间至30min)

6. 终止:每孔加入100μL反应终止液终止反应。此时,标准品或有ALP活性的孔会呈现不同深浅的黄色。

7. 检测:405nm测定吸光度。如果不能测定405nm,也可以在400-415nm范围内检测吸光度。如果不能立即测定,可以在数小时内完成测定,所显现的黄色在数小时(≤ 6h)内稳定。

8. 结果分析

碱性磷酸酶活性单位的定义:在pH9.8的二乙醇胺(diethanolamine,DEA)缓冲液中,37℃条件下,每分钟水解pNPP显色底物产生1μM p-nitrophenol所需的ALP量定义为一个酶活力单位,也被称作一个DEA酶活力单位。在pH9.6的甘氨酸缓冲液中,25℃条件下,每分钟水解pNPP显色底物产生1μM p-nitrophenol所需的ALP量定义为一个酶活力单位,也被称作一个甘氨酸酶活力单位。一个甘氨酸酶活力单位约相当于3个DEA酶活力单位。本试剂盒测定的是DEA酶活力单位。*,根据酶活性单位的定义,计算出样品中的碱性磷酸酶活性。