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Aureobasidin A(AbA)金担子素A 60231ES
物品单位 价格 品牌
875 Yeasen
  • 产地:china
  • 型号:1mg
  • 货号:60231ES03
  • cas:127785-64-2
  • 发布日期: 2020-03-19
  • 更新日期: 2022-05-13
产品详细说明
产地 china
品牌 Yeasen
货号 60231ES03
用途范围
英文名称 Aureobasidin A
纯度 %
CAS编号 127785-64-2
规格 1mg
保质期 有效期2年
是否进口

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Aureobasidin A(AbA)金担子素A

60231ES03

1 mg

1366.00

Aureobasidin A(AbA)金担子素A

60231ES08

5×1 mg

4266.00

Aureobasidin A(AbA)金担子素A

60231ES10

10×1 mg

7676.00


产品描述

金担子素A(Aureobasidin A,AbA)是从丝状真菌Aureobasidium pullulans No. R106中分离出来的环酯肽类抗生素,具有很强的抗真菌能力。在较低的浓度下(0.1-0.5 μg/mL)即可对酵母产生毒性。对其敏感的真菌种类包括:出牙酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)和黑曲霉(A. niger.)。作用机制在于AbA抑制了真菌生长所依赖的肌醇磷酰胺(inositol phosphorylceramide,IPC)合成酶的活性,干扰鞘脂合成,从而进一步杀死菌株。编码IPC合成酶的基因研究较多的有来自酿酒酵母菌的AUR1 基因,以及构巢曲霉的AURA基因,两者具有同源性。通过对这些编码基因进行突变即可使得菌株对AbA产生抗性,如AUR1-C基因。

AbA非常适合用作阳性*子筛选用的药物选择性标记。AbA抗性也是酵母单/双杂交研究中理想的报告子。本品为溶于甲醇的AbA溶液,浓度为1 mg/mL。具体的工作浓度取决于宿主细胞的敏感度(见表1. AbA对各种酵母菌的*抑菌浓度(MIC))。


产品性质

分子式(Formula)

C60H92N8O11

分子量(Molecular   weight)

1100   g/mol

纯度(Purity)

≥95%

熔点(Melting   point)

155-157℃

结构式(Structure)

blob.png


运输和保存方法

冰袋运输。2-8℃保存,有效期2年。


操作步骤(抗AbA的酵母转化系统)


1. 加入0.5 mL过夜培养的酵母到50 mL YPD培养基中(配方:1 L液体培养基含有10 g yeast extract,20 g polypeptone,20 g D-glucose;固体培养基另外加入2%琼脂)。

2. 30℃培养约6小时,测定OD660为1~2。使用二倍体时,测定OD660为2~4。

3. 1,000×g离心5分钟。
4. 用10 mL Solution A(配方:100 mM Lithium acetate,10 mM Tris-HCl pH 7.5,1 mM EDTA)悬浮沉淀,1,000×g离心5分钟。

5. 用Solution A重悬沉淀,直到OD660为150。

6. 在管内分取100 μL细胞悬浮液,30℃培养1小时。

7. 加入5 μg载体(环状或线性DNA)和150 μg Carrier DNA(已经过100℃加热10分钟,并迅速冷却)。

注:pAUR101需使用线性DNA进行转化。使用环状DNA会降低转化效率甚至转化不成功。pAUR112和pAUR123需使用完整的质粒DNA进行转化。

8. 加入850 μL Solution B(配方:取40 g Polyethylene Glycol 4000溶于100 mL Solution A充分溶解,需要现用现配),轻轻混匀。

9. 30℃培养30分钟后,42℃培养15分钟。

10. 室温放置10分钟。

11. 5,000 rpm离心1分钟,用5 mL YPD培养基悬浮沉淀。

12. 30℃培养6小时~过夜。

13. 5,000~10,000 rpm离心,用1-10 mL 0.9% NaCl悬浮沉淀。
14. 在YPD选择培养基平板(含一定浓度的AbA,依菌株类型而定)上接种100 μL细胞悬液。30℃培养3-4天后转化完成。

15. 挑取阳性转化子,和/或测定转化效率(以每微克质粒DNA转化的菌落数来表示)。


注意事项

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. AbA的*工作浓度因宿主细胞不同而有差异,可根据*抑菌浓度(MIC)来确定。

表1 Aureobasidin 对各种酵母菌的*抑菌浓度

菌株

MIC(μg/mL)

S.cerevisiae

ATCC9763(diploid)

0.2-0.4

SH3328(haploid)

0.1

Sake yeast(diploid)

0.1-0.2

Shochu yeast(diploid)

0.1

Beer yeast(triploid or tetraploid)

0.1

Baker’s yeast(diploid)

0.2-0.4

Schizo.pombe

JY-745(monoploid)

0.1

C.albicans

TIMM-0136(diploid)

0.04

C.tropicalis

TIMM-0324(diploid)

0.08


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