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Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix f 11123ES
物品单位 价格 品牌
236 Yeasen
  • 产地:China
  • 货号:11123ES10
  • 发布日期: 2020-03-19
  • 更新日期: 2021-08-05
产品详细说明
产地 China
品牌 Yeasen
货号 11123ES10
用途范围 逆转录
纯度 %
CAS编号
规格 10 T
是否进口


Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR

(gDNA digester plus)


产品信息


产品名称

产品编号

规格

储存

价格(元)

Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)

11123ES10

10 T

-20

236.00

Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)

11123ES60

100 T

-20

955.00


产品描述


Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)基于Hifair®  Reverse Transcriptase而开发的即用型预混液。该酶的热稳定性大幅度提高,可耐受高达50的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。

该预混液包含gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus。gDNA digester可去除RNA模板中残留的基因组DNA污染,保证后续结果更加可靠。2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有逆转录反应所需的所有组分(Buffer,dNTP,Hifair® Ⅱ Reverse Transcriptase,RNase inhibitor,Random primers/ Oligo (dT)18 primer mix),只需加入RNA模板和 RNase-free ddH2O即可进行逆转录反应,并同时终止gDNA digester的作用,保证cDNA的完整性。

该产品适用于两步法RT-qPCR检测,针对qPCR进行Random primers/ Oligo (dT)18 primer的比例优化,使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始,并具有相同的逆转录效率,///大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。逆转录产物兼容SYBR® Green和探针法qPCR,可以根据实验目的,选择UNICON® qPCR SYBR® Green Master Mix,Hieff® qPCR SYBR® Green Master Mix或Hieff® qPCR TaqMan Probe Master Mix等试剂配合使用,进行高性能的基因表达分析。


产品组分

编号

组分

产品编号/规格

11123ES10 (10 T)

11123ES60 (100 T)

11123-A

RNase-free ddH2O

1 mL

1 mL

11123-B

5×gDNA digester Buffer

20 μL

220 μL

11123-C

gDNA digester

10 μL

100 μL

11123-D

2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus

100 μL

mL

】:2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有gDNA digester抑制剂。


运输与保存方法


干冰运输。-20保存。


注意事项

1)gDNA digester和2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus含有高浓度的甘油,使用前请短暂离心,吹打混匀。

2)建议RNA是溶于水而不是TE Buffer因为TE Buffe会干扰gDNA去除以及逆转录反应

3)可以不经过基因组去除步骤,直接进行逆转录,这样所得到的结果与使用Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix  (Cat  11120ES) 效果一致。但是请勿将gDNA digester与11120ES中的2×Hifair® Ⅱ SuperMix配套使用,因不含终止gDNA digester反应的成分,会影响反转录和后续的qPCR实验

4)反应液的配制应在冰上操作完成,操作过程应避免RNase污染;

5) 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


第—链cDNA合成操作步骤


1. 残留基因组DNA去除

在RNase free离心管中配制如下混合液,用移液器轻轻吹打混匀。42孵育2 min。

组分

使用量

RNase free ddH2O

To 10 μL

5×gDNA digester Buffer

2 μL

gDNA digester

1 μL

Total RNA

1 ng -5 μg*

or mRNA

1 ng-500 ng*

【注】20 μL逆转录反应体系建议Total RNA的投入量不超过1 μg。如果目的基因的表达丰度低,多投入5 μg Total RNA,否则RNA投入量过高,可能会超过后续定量PCR的线性范围。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

在第1步的反应管中直接加入2×HifairTM Ⅱ SuperMix plus,用移液器轻轻吹打混匀。

组分

使用量

第1步的反应液

10 μL

2×Hifair® Ⅱ SuperMix plus

10 μL

3. 逆转录程序设置

标准程序(适用于微量和常规量的模板量)

温度

时间

25

5 min

42

30 min

85

5 min

】:逆转录温度:推荐使用42。对于高GC含量模板或者复杂模板,可将逆转录温度提高到50

4. 逆转录产物可立即用于qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。


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货号

规格

(元)

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