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大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签) 20401ES
物品单位 价格 品牌
425 Yeasen
  • 产地:China
  • 货号:20401ES60
  • 发布日期: 2020-03-19
  • 更新日期: 2020-03-19
产品详细说明
产地 China
保存条件 -20℃
品牌 Yeasen
货号 20401ES60
用途范围
纯度 %
CAS编号
规格 100 U
保质期
是否进口

产品信息

产品名称

产品编号

规格

储存

价格(元)

Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签)

20401ES60

100 U

-20℃

425.00

Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签)

20401ES70

200 U

-20℃

625.00

Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签)

20401ES76

500 U

-20℃

1245.00

Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签)

20401ES80

1000 U

-20℃

2145.00

Enterokinase, Recombinant, Expressed in E.coli大肠杆菌表达重组肠激酶(不带标签)

20401ES90

5000 U

-20℃

6745.00


产品描述

重组肠激酶 (rEK)是高纯度的牛肠激酶轻链亚基,它有着和天然提取的肠激酶同样特异的切割酶活性,切割位点Asp-Asp-Asp-Asp-Lys,可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白,以除去不需要的融合标签,本rEK具有比天然酶更高的切割活性。

本品为采用重组大肠杆菌分泌表达的高纯度、高活性、高特异的牛肠激酶,适用范围广,并且在各种去垢剂和变性剂存在的条件下仍具有部分活性。本品不含标签,由于具有极高酶切活性,酶切反应使用量少,不影响下游蛋白应用,故后续不需将其去除。


产品组分

编号

组分

产品编号/规格

20401ES60

20401ES70

20401ES76

20401ES80

20401ES90

20401-A

rEK重组肠激酶

100 U

200 U

500 U

1000 U

5000 U

20401-B

10×rEK   Reaction Buffer

2   mL×1

2   mL×2

2   mL×5

2   mL×10

2   mL×50


运输和保存方法

冰袋运输。试剂盒 内各组分-20°C保存两年,尽量避免反复冻融。


基本特性

来源(Source)

E.Coli

分子量(Molecular   Weight)

理论值25.850 kDa

外观(Appearance)

无菌液体

酶浓度(Enzyme Concentration)

10000 U/mL,相当于10   U/uL

活性定义(Activity Definition)

一个活性单位定义为25°C,12-16 h,在25   mM Tris-HCl,Ph 8.0缓冲体系下,将500   μg带有肠激酶酶切位点的融合蛋白切开95%所需要的酶量

内毒素检测(Endotoxin)

用LAL法测定内毒素含量小于1 EU/μg

质量保证(Quality assurance)

经多次柱纯化,SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带;本制品中不含有非特异性的蛋白酶切活性

常见影响肠激酶活性的因素(Influence factors)

2 M尿素,>200   mM NaCl,>20 mM β-ME,>0.1%SDS,>50 mM咪唑,或>5%甘油


应用举例

 

【注】该酶效力高且待切蛋白结构性质不同,建议先进行预实验摸索酶使用浓度及酶切反应时间。

1)反应体系(1000 μL)

融合蛋白

0.5-1 mg(蛋白浓度:0.1-1 mg/mL)

Enterokinase

1-2 U

10×rEK Reaction Buffer

100 μL

补DDW(超纯水)

To 1000 μL

2)反应条件:25°C过夜酶切(注:完全酶切需要16-24 h)。

【注】重组肠激酶可使用25 mM Tris-HCl pH 8.0稀释成每1 μL含0.1单位的溶液使用。


注意事项


1)本产品提供适量10×rEK Reaction Buffer, 如实验需求更多Buffe,可按本说明书中提供的配方自行配备。
2)如果样品溶液中含有上述成分的一种或多种,为获得理想的酶切结果,请先将样品透析到25 mM Tris-HCl 8.0缓冲液中,然后再进行酶切实验;若不方便透析,可将样品稀释,使得各组分低于干扰浓度后再酶切,酶的用量与蛋白比例不变;若干扰因素很多,且不便去除,需要适当增加酶量或延长酶切时间,有助于得到理想的酶切效果。
3)磷酸盐对Enterokinase有很强的抑制作用,痕量的磷酸盐都会严重影响Enterokinase的活性,因此在酶切体系内不能存在磷酸盐。
4)本品是具有高酶活力重组肠激酶,切割蛋白使用量少,可不考虑除去。

5)蛋白酶切效果不好,可适当增加酶量,或适当延长酶切时间。

6)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


FAQ

1)请问可否提供该重组肠激酶酶切效果验证结果?

使用0.1 U本品酶切50 ug底物,反应条件是25℃,酶切不同时间梯度(8 h,16 h,24 h,40 h,48 h,64 h)。

QQ图片20180901132631.png

重组肠激酶酶切底物24 h,可完全酶切,更长时间的酶切特异性良好。

2)如果需要去除重组肠激酶,该*去除?

本品不含标签,后续如需去除重组肠激酶,可用阴离子交换树脂(eg.DEAE-FF)对其进行洗脱。推荐洗脱条件如下:

平衡缓冲液:25 mM Tris-HCl pH 8.0

洗脱缓冲液:25 mM Tris-HCl pH 8.0,含100 mM NaCl
注:①如果使用纯化柱,注意流速不要太快。确保样品与胶的接触时间不少于10 min。也可以直接将胶加入到酶切缓冲液中直接动态吸附30 min。②如酶切缓冲液中含有其他成分,如NaCl,甘油等,会影响吸附效果。

 

附100 mL 10×rEK Reaction Buffer配置方法

1.配置1 M Tris-HCl, pH 8.0,高压灭菌后使用。
2.取50 mL去离子水,加入110.99 mg无水CaCl2充分溶解后,加入1 mL Tween-20充分混匀;
3.加入25 mL高压灭菌的1 M Tris-HCl,pH 8.0,充分混匀。

4.定容至100 mL,-20℃保存。