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组织/细胞线粒体分离试剂盒 20128ES
物品单位 价格 品牌
786 Yeasen
  • 产地:China
  • 货号:20128ES50
  • 发布日期: 2020-03-18
  • 更新日期: 2022-01-30
产品详细说明
产地 China
品牌 Yeasen
货号 20128ES50
用途范围
纯度 %
CAS编号
规格 50 T
是否进口

产品信息

产品名称      

产品编号

规格

储存

价格(元)

Mitochondria Isolation Kit  for Cell and Tissue 组织/细胞线粒体分离试剂盒

20128 ES50

50 T

-20℃

786.00

Mitochondria Isolation Kit for Cell and Tissue 组织/细胞线粒体分离试剂盒

20128ES60

100 T

-20℃

1365.00


产品描述

线粒体是绝大多数真核细胞内的一种基本的重要的细胞器,是细胞的动力工厂,细胞进行氧化磷酸化的场所。因此,对线粒体进行分离,以此为对象,对线粒体呼吸作用、mtDNA、mtRNA以及其他线粒体蛋白性能分析等具有重要意义。

本试剂盒可用于快速便捷分离组织/细胞线粒体,获得的线粒体纯度较高,且绝大部分都含有完整的内膜和外膜,可用于线粒体的生理功能等方面的研究,得到的线粒体也可被相应裂解液裂解得到线粒体蛋白,从而用于后续SDS-PAGE、Western、双向电泳及免疫共沉淀等分析。

按照每个样品使用量(细胞1-5×107个;组织:100-200 mg),20128ES50/20128ES60可分别进行50个和100个样品的抽提。


产品组分

组分编号

组分名称

产品编号/规格

20128ES50(50 T)

20128ES60(100 T)

20128-A

Reagent A 试剂A

100 mL

100 mL×2

20128-B

Reagent B试剂B

50 mL

100 mL

20128-C

Reagent C试剂C

1 mL

2 mL

20128-D

台盼蓝染色液

10 mL

20 mL


运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存,有效期1年。台盼蓝染色液可4℃保存。


注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用方法

一、线粒体的抽提

1. 样本处理
1)组织匀浆:称取100-200 mg新鲜组织,预冷的PBS或生理盐水冲洗干净,滤纸吸干,用剪刀剪成非常小的碎块放入小容量玻璃匀浆器内。加入1-2.5 mL冰预冷的试剂A,混匀,孵育8-10 min,匀浆10-30下左右,也可采用超声方法破膜。
2)培养细胞匀浆:消化细胞,PBS洗涤,800 g,4℃ 离心5-10 min收集细胞。计数,每次提取需要1-5×107个细胞,加入1-2.5 mL预冷的试剂A,重悬细胞,混匀,冰上孵育10-15 min,可以采用超声或匀浆器方法破膜。
注:观察细胞膜破碎情况,可取少量细胞液,与台盼蓝染色液按照1:1比例混合后,镜检。当大多数(≥80%)细胞为蓝色,可进行下面实验。

2. 将组织或细胞匀浆物转移到离心管,4oC,1000 g离心10 min。【注】:细胞核、大的膜碎片、未裂解细胞等沉淀在管底。 

3. 收集上清液并转移到新的离心管。4oC,1000 g 再次离心5 min。弃沉淀。
4. 将上清液转移到新的离心管。4oC,12,000 g离心10 min,小心去除上清,沉淀即为分离得到的细胞线粒体。
注:离心后的上清含胞浆成分,尽量除去上清。


二、线粒体蛋白的抽提

1. 向每毫升预冷试剂B加入10 μL试剂C混匀。冰上保存数分钟待用。

2. 按每10 μL线粒体压积中,加入100 μL上述配制好的试剂B/C溶液。

3. 置于4℃ 15-30 min,间断涡旋振荡。

4. 10,000 rpm,4℃离心15 min,取上清,即为线粒体全蛋白提取物,进行蛋白定量。

5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。


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