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Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶 11300ES
起批量( 价格
≥1 ¥1623元/克
  • 供货能力:长期大量现货
  • 最低订购量:1克
  • 建议零销价:1623元/克
  • 发布日期: 2020-03-20
  • 更新日期: 2020-03-20
产品详细说明
用途范围: 逆转录 纯度: %
CAS编号: 产地: China
品牌: Yeasen 规格: 10000 U
货号: 11300ES92 是否进口:

Hifair® V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

产品信息

产品名称          

产品编号

规格

价格(元)

Hifair®  V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

11300ES92

10000   U

1623.00  

Hifair®  V Reverse Transcriptase 第五代耐热逆转录酶

11300ES93

50000   U

5623.00  


产品描述

Hifair® V Reverse Transcriptase是在Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase基础上通过基因工程技术得到的全新逆转录酶,与Hieff® M-MLV (H-) Reverse Transcriptase相比,其热稳定性大幅度提高,可耐受高达60℃的反应温度,适合具有复杂二级结构的RNA模板的逆转录。同时,该酶增强了与模板的亲和力,适合少量模板以及低拷贝基因的逆转录。Hifair® V Reverse Transcriptase合成全长cDNA的能力也有了提升,可扩增长达10 kb的cDNA。


产品组分

编号

组分

产品编号/规格

11300ES92 (10000   U)

11300ES93 (50000 U)

11300-A

Hifair® V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

50 μL

250 μL

11300-B

5×Hifair® V   Buffer

250 μL

1.25 mL


产品应用

一步法RT-qPCR;基因*;荧光定量。


活性定义

以Poly(A) Oligo(dT)为模板-引物,在37℃,10 min内,将1 nmol的dTTP掺入为酸不溶性物质所需要的酶量定义为1个活性单位(U)。


质量控制

核酸外切酶残留检测:200 U本酶和1 μg λDNA-Hind Ⅲ,37℃下孵育1 h,DNA的电泳谱带不发生变化。

核酸内切酶残留检测:200 U本酶和1 μg Supercoiled pBR322 DNA,37℃下孵育1 h,DNA的电泳谱带不发生变化。

RNase残留检测:200 U本酶和1 μg小鼠*总RNA,37℃下孵育1 h,RNA电泳谱带不发生变化。


运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存,有效期2年。


注意事项

1)请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用耗材均需保证RNase free,以防止RNase污染;

2)所有操作均应在冰上进行,防止RNA降解;

3)为保证高效率逆转录,建议使用高质量的RNA样本;

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

第一链cDNA合成操作步骤

1. RNA变性(此步为可选步骤,RNA变性有助于打开二级结构,可在很大程度上提高第一链cDNA的产量。)

组分

使用量

RNase   free ddH2O

to 13   μL

Oligo   (dT)18 (50 μM)

or   Random Primers (50 μM)

or Gene   Specific Primers (2 μM)

1 μL

or 1   μL

or 1   μL

模板RNA

Total   RNA: 1 ng -5 μg或mRNA:1 ng-500 ng

65℃加热5 min,迅速置于冰上冷却2 min。简短离心收集反应液后,加入下表中的逆转录反应液,并轻轻吹打混匀。

2. 逆转录反应体系配制(20 μL体系)

组分

使用量

上一步的反应液

13 μL

5×Hifair®   V Buffer

4 μL

dNTP   Mix (10 mM)

1 μL

Hifair®  V Reverse Transcriptase (200 U/μL)

1 μL

RNase   inhibitor (40 U/μL)

1 μL

3. 逆转录程序设置

温度

时间

25℃

5 min

42℃

15-30  min

85℃

5 min

【注】:1)当使用Random Primers时,需25℃,孵育5 min;若使用Oligo (dT)18或Gene Specific Primers,此步可省略。

2)逆转录温度:推荐使用42℃。对于高GC含量模板或者复杂二级结构的模板,可将逆转录温度提高至50-55℃。

3)85℃加热5 min,目的是使逆转录酶失活。

※ 逆转录产物可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后,于-80℃保存,避免反复冻融。


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货号

规格

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HB200122